麝黄消瘤汤诱导人肝癌细胞系Bel7402凋亡的研究.pdfVIP

第23卷第6期 中 医药学 刊 Vbl_23NO．6 2005年6月 CHINESEAROHIVESOFTRADITIONALCHINESEMEDlCINE Jun．，2005 文章编号：1009—5276{2005)06—1095—03 张晓丽1，成肇仁2 (1．杭州市中医院肿瘤科，浙江杭州310007；2．湖北中医学院伤寒教研室，湖北武汉430061) 摘要：目的：研究麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel—7402)的诱导凋亡作用。方法：制备含药血清，孵 化人肝癌细胞系(Bel一7402)，用电子显微镜观察法、荧光显微镜观察法研究凋亡细胞超微结构，用流式细胞 仪检测凋亡细胞DNA直方图及凋亡率。结果：电子显微镜及荧光显微镜下，麝黄消瘤汤含药血清诱导人肝 癌细胞系(Bel一7402)出现凋亡征象。最大凋亡率为50．96％。流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图上出现 亚二倍体峰，细胞周期分布频率与对照组有显著区别(P≤0．05)。结论：麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel一 7402)有显著的诱导凋亡作用。 关键词：肝细胞癌；体外培养；麝黄消瘤汤；含药血清；细胞凋亡 中图分类号：R256．4文献标识码：B 麝黄消瘤汤是成肇仁教授多年应用于肝癌治疗的、 别加入含药血清浓度为10％、15％、20％的培养液5mL 疗效确凿的中药方剂。为了进一步研究该方的抗肿瘤作 并设完全培养液和单纯培养液作对照组分别培养48h、 用及其机制，本文用电子显微镜、荧光显微镜研究凋亡细 胞超微结构，用流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图 及凋亡率等技术及方法，研究麝黄消瘤汤含药血清对人 长状态观察。 肝癌细胞系(I％1—7402)的诱导凋亡作用。 细胞爬片的荧光染色及观察将用上法培养的细胞 1材料和方法 固定，取出盖玻片室温风干，用适量粘片剂将其黏于载玻 1．1 药物 片上。固定，自然干燥，加0．1mL的二苯酰胺染色1h(避 麝香、牛黄、蛰虫、莪术、黄芪、党参、半枝莲、白花蛇 X20倍)下 光)，自然干燥，甘油封片。在荧光显微镜(10 舌草等。 作细胞凋亡的形态学观察及凋亡细胞计数(细胞总数大 1．2主要试剂及设备 于2000个)。 DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶由美国Gibco公 1．7 电子显微镜下麝黄消瘤汤含药血清诱导的人肝癌 司提供；PI染色试剂购自美国BD公司；二苯酰胺细胞系(Bel一7402)的凋亡征象 (Hoechst33258)、硫柳汞(thsmers01)购自美国Sigma；二 用培养瓶传代人肝癌细胞系(Bel一7402)，刮片收集 氧化碳培养箱(ModelINCUBATOR)购自Sheldon cch 含药血清浓度分别为10％、20％，孵育48h、72h及完全 Manufactumginc．。Ck2倒置相差显微镜及荧光显微镜培养液培养48h的培养细胞(细胞数大予106，各组简称 购自Et本OLYMPUS公司，H300透射电子显微镜购自 日本日立公司。 离心，沉积细胞固定，脱水，浸透，包埋，聚合，超薄切片， 1．3 动物 硝酸铀、柠檬酸铅染色，晾干，在透射电子显微镜下观察。 Et本大耳白兔购自同济医科大学实验动物中心。 1．8麝黄消瘤汤含药血清诱导的人肝癌细胞系(Bel一 1．4 细胞系 7402)DNA直方图、凋