重组水蛭素口服给药的抗凝血效应.pdfVIP

重组水蛭素口服给药的抗凝血效应 1 2 3 4 阎雪莹 ，唐晓飞 ，张学农 ，张强 1 黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨 (150040) 2 黑龙江省哈尔滨市香坊区疾病预防控制中心，哈尔滨 (150031) 3 苏州大学药学系，浙江苏州 (215007) 4 北京大学药学院药剂系，北京 (100083) E-mail：yanxuey@ 摘 要：目的：考察不同剂量重组水蛭素-2 （rHV2 ）口服给药后的抗凝血效应。方法：以 凝血时间（CT －Clotting Time ）和凝血酶时间（TT-Thrombin Time ）为指标，测定大鼠口服 不同剂量的rHV2 的抗凝血效应。结果：rHV2 口服给药后，凝血时间及凝血酶时间试验均 表现出显著的抗凝血效果。而且从给药后 1h 到4h 抗凝效应一直延续。并且还可以说明这种 抗凝血效应是有剂量依赖性的。当剂量范围在50 mg·kg-1~100 mg·kg-1 之间，抗凝血效应随 着剂量的增加而加强。结论：rHV2 经大鼠口服后能够产生抗凝血效应，说明rHV2 的口服 是可行的。 关键词：重组水蛭素-2；口服；抗凝血；药效学 中图分类号：R969.1 文献标示码：A 1. 引言 水蛭素是一种由65 个氨基酸残基组成的多肽，是目前已知的作用最强的天然凝血酶抑 制剂[1,2] 。由于多肽类药物易被消化道中的酶降解而失去活性，因此这类药物的给药途径以 注射为主。但频繁注射给病人带来很大的不适，因此开发水蛭素的口服给药制剂具有很大的 价值。韩玉珉等[3]证明重组水蛭素-2(rHV2)经十二指肠给药后表现出明显的抗凝血作用，但 作用弱于注射给药。本研究考察了rHV2 口服给药后的抗凝血作用，进一步验证完整的胃肠 道环境对于rHV2 活性的影响。从而为开发水蛭素口服给药制剂奠定了理论基础。 2. 实验材料 2. 1 试剂与药品 rHV2 （4067 ATU·mg-1 ，北京大学生命科学院）。凝血酶（54 U·mg-1 ，Sigma 公司）。Tris HCl (Sigma 公司) 。 2.2 主要仪器 电热恒温水浴锅（北京医疗设备厂）。精密电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）。 秒表（上海手表厂）。 2.3 实验动物 SD 大鼠（♂，200g ），维通利华实验动物中心。 3 实验方法 3.1 凝血时间（CT ）测定方法 称量rHV2 ，加生理盐水配成溶液。大鼠随机分组，每组5 只，分别按50 mg·kg-1 ，75 -1 -1 mg·kg ，100 mg·kg 的剂量灌胃给药。灌胃体积2 ml 。给药前的凝血时间测定值设为对照。 - 1 - 在选定的时间点用毛细管从眼眶静脉丛取 5cm 长的血柱。每隔 20s 折断毛细管一小截，检 查有无凝血丝。记录从毛细管采血至出现凝血丝的时间，即为凝血时间[3] 。 3.2 凝血酶时间（TT ）测定方法 3.2.1 溶液的配制 -1 凝血酶储备液：取一小瓶内含5000U 的牛凝血酶，加入生理盐水5 ml 使溶解， 100U·ml 再加入硫酸钡100 mg，于37℃下温育20 min ，将上清液移至0.85%生理盐水20 ml 内，再 加甘油25 ml，混合。-20℃保存。 pH 3.5 Tris 缓冲液：取Tris （一级生化试剂）6.0 g，氯化钠6.6 g，0.1mol·L-1 盐酸440.0 ml ，蒸馏水加至1000 ml，4 ℃下保存。 凝血酶工作液：取凝血酶储备液0.1 ml，加pH 3.5 Tris 缓冲液0.6 ml 混合，于37℃下 [4] 温育20 min 。即为凝血酶工作液 。 3