实时荧光定量聚合酶链反应检测宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒1618型感染.pdfVIP

一659— 实时荧光定量聚合酶链反应检测宫颈 脱落细胞人乳头瘤病毒16／18型感染 蔡兰1，刘 颖1，瞿文圹，谢军花1，邹先进1，王梅1，姚爱香1 (1．荆门市第一人民医院，湖北荆门448000；2．温州医学院附属第一医院) cm 子宫颈病变是女性最常见的疾患之一，其中最 cm×O．8 1．2．1细胞标本采集用体积约1．5 严重的是宫颈癌，而人类乳头瘤病毒(m)v)感染与×o．8cm无菌棉签插入宫颈口，均匀用力旋转3周， 宫颈上皮内瘤变(cIN)和宫颈癌的发生有密切关取出棉签涂片后，将棉签放入装有生理盐水的无菌 系[1】。HPv的亚型，现在发现已超过100种，其中感试管内震荡洗涤，弃棉签，离心沉淀，用沉淀的细胞 染生殖道的Ⅲ)v亚型有近30种，可分为低危型和提取DNA。 Bethes如 高危型[2’33j低危型主要是HPV6．11型，与尖锐湿1．2．2细胞学涂片检验结果按TBS(1he 疣有关；高危型主要是HPVl6．18型，与宫颈癌发生system)分类。 相关。有文献报道宫颈鳞癌HPv感染率可高达 1．2．3对229例同时行宫颈细胞学和组织学检查 93％～loo％L3 的细胞及组织标本，分别行FQ．PCR J，因此，检测子宫颈病变是否感染 HPv高危型成为防治宫颈癌的重要一环。我们采 检测。 用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)方法[4】，检 固定过夜后，切取3～5nm3组织放入1．5rnl无菌试 测宫颈涂片后剩余的细胞内HPvl6．18型感染状 管内(剩余组织做常规石蜡切片)。将试管内组织碾 况，以便建立快速，准确检测m)v16．18型DNA的方 法，为临床判断宫颈病变发展趋势，制定治疗方案和 碎匀浆，加入lITll无菌生理盐水洗涤三次，每次间 随诊计划提供依据。 隔30分钟，以便彻底洗脱甲醛。所有标本均采用常 l材料和方法 规的碱裂解法提取HPvDNA。 1．1材料 1．2．5F．Q—PCRHPvl6．18型DNA扩增各反应管 放入PE7700自动荧光检测仪，按下列条件扩增： 1．1．1标本来源收集2002．10．10。2003．11．10． 湖北省荆门市第一人民医院和浙江省温州医学院附 属第一医院妇产科送检宫颈细胞标本3985份。3共做40个循环。反应结束后，由电脑自动分析计算 985例细胞涂片中对不正常上皮细胞分别诊断为低 出结果。 度鳞状上皮内病变(LS几)，高度鳞状上皮内病变1．2．6统计学方法采用x2检测。定量结果采用 (Hs几)，不典型鳞状上皮细胞(ASC)，不典型腺上皮 均拷贝数，阴性结果不参加平均值的统计。 细胞(AGC)及鳞状细胞癌病例共278例，其中进一 2结果 步做宫颈活检的有229例。 ． 1．1．2仪器PE7700自动荧光PCR仪(ABIpri锄 7700 Detector，美国PerkinEhner公司)。 以起始拷贝数的自然对数为横坐标，以循环阈值为 Sequence 纵坐标，可以得到一条严格的直线