猪瘟病毒兔化弱毒株全长cDNA克隆的感染性鉴定.pdfVIP

Vol 2 第20卷 第2期 病 毒 学 报 20 No 1 1 1 1生§旦 笠HI堕!蔓垦』Q堕B盟△kQE!!垦12幽鱼X 』婴! ；!!! = 猪瘟病毒兔化弱毒株全长cDNA克隆的感染性鉴定 胡建和1一，刘湘涛2，郭东升1，张淼涛3，田宏2，张彦明3，谢庆阁2 (1河南职业技术师范学院动物科学系，河南新乡453003； 2中国农业科学院兰州兽医研究所， I限制性内切酶将构建的猪瘟病毒兔化弱毒株(C-株)全长cDNA线性化，体外转录获得其基因组 摘要：用Srf 直接法、夹心ELISA进行鉴定。结果表明，所构建的全长cDNA具有感染性。猪瘟病毒。株全长感染性cDNA的 成功构建，为在分子水平上进一步研究中国猪瘟病毒兔化弱毒株提供了极有价值的研究工具。 关键词：猪瘟病毒；c株；全长cDNA；体外转录；转染；感染性鉴定 中圈分类号：$2,52651 文献标识码：A 文章编号：1000—872112004)02—0143—05 猪瘟是猪的一种高度接触性传染病，以发热和 疫苗的生产等方面的研究，打下坚实的基础‘“。 出血为主要特征，常致猪的死亡。该病在世界各地 的间歇性爆发，造成了巨大的经济损失，被OIE列 枕料s方法 为A类传染病。猪瘟病毒(classicalswinefever 1试验材料采用胡建和等所构建的猪瘟病毒c株全长 virus，CSFV)属黄病毒科(Flaviridae)瘟病毒属 (Pestivirus)，是一种(40nm～60nm)有囊膜的病毒， 州兽医研究所病毒室保存的SK一6细胞系。 含有单股正链RNA基因组…。CSFV基因组长约 2所用试剂噩限错性酶Low-melting—pointAgarose及A— 12．3kb，仅含有一个大的开放性阅读框架(ORF)，编 码3898个氨基酸残基。在病毒和宿主细胞蛋白酶的 garACEoA-garose-digesting 制性内切酶Srf 作用下加工为成熟蛋白，CSFV的所有结构蛋白和 ScaleRNAProduction Promega公司的RiboIⅥtmxT”Large 非结构蛋白均由该ORF所编码，其结构蛋白和非结 构蛋白在病毒RNA上的编码顺序为Np”、C、E” (E0)、E1、E2、P7、NS2—3、NS4A、NS4B、NS5A、 NS5B o引。 记抗体工作液(购白中国兽药监察所)。猪瘟病毒检测采用 SwineFeverVies Test IDEXX公司的Classical Kit。 我国对猪瘟病毒的分子生物学研究起步较晚， Antigen 由于RNA本身的结构特点和不稳定性，相对于 Reagent TotalRNA Isolation DNA病毒来说，更增加了对其分子结构及功能研究