对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响.pdfVIP

·7。 低氧环境中几种中药注射液对大鼠骨髓间 充质干细胞增殖的影响※ 王明宁 青海大学医学院(810001) 胡琳 青海高原医学研究所(810012) 摘要 目的：探讨在低氧环境下雪莲、红花和红景天注射液对大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs) 增殖的影响。分离、纯化、培养大鼠rMSCs细胞，选择雪莲、红花和红景天注射液，通过四甲基偶氮 进作用。结果：在低氧条件下红景天注射液对rMSCs的增殖效率与对照组比较差别有显著性，有 明显的增殖作用。而红花注射液对rMSCs的增殖无显著作用。雪莲注射液对rMSCs的增殖率有 明显的抑制作用。结论；红景天注射液在低氧条件下具有促进rMSCs增殖的作用。雪莲注射液在 低氧条件下具有抑制rMSCs增殖的作用。 关键词骨髓间充质干细胞细胞增殖中药 中图分类号R965R339．5 stem 骨髓间质充质干细胞(mesenchymal 限公司。 cells，MSCs)是目前倍受关注的一类具有多分化潜 能的成体千细胞，具有取材方便，体内可以随血液循 2方法 环到受损伤部位参与修复损伤的优点[1]。但是骨髓 2．1大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养取体 中MSC含量极其稀少，仅为单个核细胞的十万分重2009SD大鼠的股骨和胫骨，用DMEM液冲出 之一到百万分之一，在自然状态下难以达到治疗所 骨髓。将冲出的骨髓液与DMEM液混合，离心 需的细胞量。目前普遍采用体外扩增MSCs的方(1．5×lO％／min)5min，去上清液后，用DMEM制 法，体外培养、增殖而获得治疗量的MSCs，目前许成悬液。用吸管沿管壁将悬液慢慢加入已装有4mL 多科研工作者正致力于开发有效扩增MSCs的方分离液的离心管中，使两种溶液间有明显的界面， 法。Lennon等在体外培养rMSCs时，发现低氧能1．9x 提高rMSCs的增殖率[2]。本研究选择了中药红花 中层白色雾状的细胞层，无血清DMEM液洗涤两 注射液、雪莲注射液和红景天注射液，利用低氧环境 次，然后用含15％小牛血清的DMEM培养液重悬， 从中筛选出能使rMSCs增殖、分化的药物，为 MSCs的临床应用提供理论依据和技术方法。 天，第1次换液，此后每7天换液两次。 2．2免疫组化按照常规方法进行。 材料和方法 2．3诱导分化对第三代MSCs经胰蛋白酶消化， 1动物、测试药SD大鼠(地方病研究所实验动物接种于6孔板，贴壁后加入成脂诱导液：高糖 中心)。淋巴细胞分离液(上海试剂二厂)；L—DMEM+0．5mM／L3--isobuty1—1一methyl】【a” DMEM(Gibcobrl公司)；胰蛋白酶(Sigma公司)； 四甲基偶氮唑(MMT)、二甲基亚砜(Sigma公司)； 酸+5ng／mLbFGF+10％自体血清，检测：茜素红 红花注射液(太原华卫药业有限公司，批准文号 染色后，普通显微镜下观察有无脂滴。 ，雪莲注射液(新疆中药总厂批准文号 2．4加药培养待细胞接近融合时，按1×10／mL 传代，传至第3代，将细胞浓度调整为2×105／mL， 鼍青海大学医学院中青年科研基金项目 万方数据 ·