外用中药【白芷香肤保健液】对黑色素产生过程中酪氨酸酶的抑制作用.docVIP

外用中药【白芷香肤保健液】对黑色素产生过程中酪氨酸酶的抑制作用 摘要 目的：通过测定【白芷香肤保健液】对酪氨酸酶的抑制率，揭示其治疗黑色素增多性疾患的机制。 方法：实验于2004—0I／05在福建中医学院毒理实验室完成，采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶活性。 结果：【白芷香肤保健液】在高(250 g／L)、中(200 g／L)、低(150 g／L)3个不同浓度对蘑菇酪氨酸酶的活性均有很强的抑制作用。最高抑制率和t值分 别是：高组97．58％，58．97；中组96．32％，59．25；低组96．14％，60．06。其抑制作用，随药物浸泡时间和浓度的增加而增强。与对照组比较，差异有显著性意义(P0．001)。 结论：【白芷香肤保健液】治疗黑色素增多性皮肤病的主要机制是抑制酪氨酸酶的活性。 主题词：黄褐斑；外用药(白芷香肤保健液)；一元酚单氧酶 0 引言 黄褐斑是一种慢性难治性色素代谢增多性皮肤病。近年来的国内外研究资料表明黄褐斑的病因与体内氧化与抗氧化平衡失调、内分泌失调、皮损区微生态失衡、机体微量元素含量异常、血液流变学改变以及紫外光照射、口服避孕药等因素有关。在治疗上，现代医学主要以化学脱色为主，如用氢醌、壬二酸、维甲酸、酚化合物等。一般需半年以上见效，且复发率高，并有造成永久脱色和药源性褐黄斑之弊心-。 由于酪氨酸酶是黑色素产生过程中的重要催化酶，控制其活力即可控制黑素生成的量。因此，本研究通过测定【白芷香肤保健液】对酪氨酸酶的抑制率，揭示其作用机制，为用于治疗黑素增多性疾患提供科学的实验依据。 1材料和方法 设计：以细胞为研究对象，重复观察测量的验证性研究。 单位：一所中医学院中药教研室。 材料：实验于2004—0I／05在福建中医学院毒理实验室完成，实验室等级为二级。仪器：752紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司，分析仪器总厂)。试剂：蘑菇酪氨酸酶(tyrosinase．EC．1，14，18，1)；DL一多巴(DL—B一3，4-dopa)。上述两种试剂均购自美国Sigma公司。药物：药物来源：【白芷香肤保健液】组方中药材，均购自福建中医学院国医堂(药材来源于福州市药材站)。经福建中医学院中药鉴定教研室金琪漾教授(原中国中医药学会中药鉴定专业委员会副主任委员)鉴定，符合中华人民共和国药典规定。方药组成：当归、山茱萸、山楂、甘草、食用白米醋等。中药制备方法：中药复方饮片打成粗粉(40目)后，称取粉末25 g于具塞三角瓶中加食用白米醋100 mE(福州民天集团公司生产，产品批号：2003／03／05A)混匀，分别浸泡60，50，40，30，20 d 5瓶，隔天震摇1次。分别过滤上清液，制得浓度为250 g／L的药液(每100 mL白米醋中含原生药25 g)。再用白醋稀释，将中药生药终浓度设定为高(250 g／L)、中(200 g／L)、低(150 g／L)3个不同浓度供试。 设计、实施、评估者：研究设计者为第一作者，实施干预者为全部作者，评估者为第一作者。 方法：酪氨酸酶活性测定方法：采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶活性。反应混合物与体积见表1。 测定时，用移液管按表1所示体积，分别准确吸取A，B，C，D 4组反应液的前3种于10 mL容量瓶中，摇匀，置37℃水浴中保温10 min，取出后加入1．5 g／LDL一多巴2 mL，于2，3，4，5，6，7，8，9 min时用分光光度计测定吸光度(A475)值。以磷酸缓冲液为空白，以不加药物的反应组为对照，分别测定酪氨酸酶的活性。每次实验重复3次，取平均值，最后按下式计算酪氨酸酶的抑制率：酪氨酸酶的抑制率(％)=[(A—B) 一(C—D)】／(A—B)X 100％，A：未加中药的加酶混合液所测的吸光度。B：未加中药亦未加酶混合液所测的吸光度。c：加中药和酶的混合液所测的吸光度。D：加中药而未加酶的混合液所测的吸光度。 主要观察指标：①主要结局：检测【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶活性。②次要结局：检测【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶的抑制率。 统计学分析：采用SPSS 10．0由福建中医学院统计学教研室进行数据处理，行组间双侧t检验。 2结果 【白芷香肤保健液】在高、中、低3个浓度对蘑菇酪氨酸酶的活性均有很强的抑制作用。最高抑制率达97．58％。【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用，随药物浸泡时间和浓度的增加而增强。 【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用与对照组比较，差异有显著性意义。(P0．001)，见表2。 3讨论 黑色素形成机制I 31：在黑色素细胞内，酪氨酸经酪氨酸酶催化形成多巴，多巴去氢后形成多巴醌，后者重新排列成5，6一醌吲哚，其发生聚合后与黑素体内的结构蛋白结合形成黑素蛋白即黑色素。黑色素合成后，从黑色素细胞输送到角阮细