外源基因在大肠杆菌高效表达的技术进展.pdfVIP

维普资讯 国堡 兰 子 塑量坌塑兰 墨苎 塑- !登 外源基因在大肠杆菌高效表达的技术进展 北京医科大学免疫 学教研室 马 大龙 辆薹 和甩基 因工程，可将外振基 导入大脑杆茵或其它工程细胞，使其作为生物工厂生产人 类篙妻 簧 目质．在嗣用大腑杆菌表达外潭蓦因耐，必须考虑表达的基因截体、外谅基 目的性质， 底竣细触启动子 ，读谒柱架及宿主苗锕羟系统遮 5个基本条件。本文结合笔者工作，介绍提 高 外源 蛰 因在太腑杆菌表选效率的一些技术进展．为提高外潭基因转录水平．可选择合适 的启 动子 改 进宿主茵谓控蒹统和射入转录整止医．在提高外潭基饵转译水平方面．需改善核糖体结台点结 扮， 考虑密码于使用的同随和增加mRNA稳定性．为提高外蔼蛋 白的稳定性，可选择蛋 白酶缺 陷 的宿 主菌． 意鬣白质N端规律．或利用外泌萎表达基因茕体． ! ’ 转录效率的一个重要途经是利用适当的强启 { ， ． 外源基因在大肠 动 子 例如PL、P 、Ptrp TSP25等均 具有 高效率的体 内转录活性 ．在基 因工程 中广为 杆菌表达的条件 ． 『 应用。作者用P 启动予表达成功人 补 体 c3 由于真棱细胞觏漂l核细胞御的基因结构 片段 ]、小 鼠自细胞介 素一2(Interleukln一2， 有很大的差异 在大肠杆 表邀真棱细胞基 IL-2J ：用P 启动子表达成功人补体 C3 因时．必须遵守以下基本条件： H段 j、B园子片段 、小 鼠IL一3 ^IL～3， 1．应用表达的质粒或噬菌体 基 因 载 IL_4 等 ．均获较 高裘这水平 在 一定条件 体 ．通过转化或转染导入宿主菌 ．并指导宿 下 ．某些弱启功子经适 当应用 也可获较商 主茵的酶系统 成鲆源蛋白。 的表达效率．如Htlang等用带 P 的puc质 2。外黉羞【目不掘带有闾蹋顺序 (内岔 粒在大肠杆菌赢达出可溶性的．具有较商活 子)，西而盛绠甩clYNA或亿学台成基 因， 性的人IL-]B 表达蛋自占菌体蛋自的l～ 不能厢基匿蛆f (g~nomicDSA)． 20％ 。为提 高启动子的强度 ，一些研究者 3．年嘻需骧 钿瞧强启动予和sD顺 序 对不 同的启动子取长补短 ．将科种启动子连 控翩外罅墓爵酌表达 接 ，使它们分别提供 一 区和～l0区，彤成 4．外掴}基因与表达载体连接后，必须 融 台启动子 。例如 ，Ptac启动子 由Ptrp的一 形成开放读鹤框槊 ．(openreadingf婶 )。 35区和PL．c的一lO区及Lac操纵基 因 (op口 为此面构蓐禽 §种不同读码框架的表达 粒 tot)组成．这样综台。~Ptrp启动子的高效率 载体 。 ． 和P 。c易调节的优点，提 高了袭达效率。目 5一为克服轴诟潼 图产物对细菌的毒害 前 ．带有这类启动子的质粒 已有商品出售 ． 作用．．需利用宿生菌的调控系统 ，调节外源 ~pDR540，pkk233—2等。Boros利用类 似的 基西的表达 。侧期对P 或 启动子 ，可用温 原刚，把rrnB基 因的p：启动予的一3区 和 度敏感性 阻遏蛋 白调控