应用绿色荧光蛋白标记技术研究钙调激_在HeLa细胞中的分布.pdfVIP

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应用绿色荧光蛋白标记技术研究钙调激_在HeLa细胞中的分布.pdf

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25 2 ( ) Vol.25 No.2 2002 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY(Natural Science) 2002 应用绿色荧光蛋白标记技术研究钙调激在HeLa 细胞中的分布吴耀春, 戴谷, 胡艳, 李朝军 ( , 210097, ) [ ] ( GFP) ( CaMK ) HeLa . , CaMK GFP , pCaMK - GFP HeLa . , , CaMK - GFP , , . ,GFP . [ ] , , [ ] Q812, [] A, [ ]2002) 0 引言 2 ( Ca / CaM- dependent protein kinase , 2 ) Ca / CaM , ! tau , . [ 1~ 3] , 2 ( Ca ) G1/ SG2/M 2 . Ca ( CaM) . [4] , CaM S G2 , , . , G2 . CaMK , G2/ M , . CaMK ( GFP) , HeLa , CaMK - GFP GFP , , , , . 1 材料与试剂 : : . : , 1977 , , . : , 1966 , , , . 12 , : HeLa 11 DH5HeLa ( ) , pTGEMTeasy ( Promega ) , pEGFPN1( CLONTECH ) . 12 pfu DNA ( NEB ) ; T4 DNA Bgl Sal !Sac Kpn!( TaKaRa ) . AMERSCO . 13 ( CaMK ) cDNA Hiroaki Kanki. ; PCR (PTC- 225,PE ) ; 2 验方法 21 pEGFP- N1 , 5∀ GAAGATCTATGGCTGTAACCTGC3∀ ; 5∀TTGTCGACTGGAGGGGTGCAACGGG3∀ . Bgl , Sal !. . 22 PCR CaMK ( CaMK ) cDNA , PCR 1. 6kb CaMK . pTGEM- Teasy , pEGFP- N1 Bgl Sal !, pCaMK - GFP . PCR , CaMK cDNA . , . 1 pCaMK - GFP 23 HeLa DMEM , 10%100IU . 37 # 5%CO . pEGFP- N1 , 2 [5] HeLa . 24 HeLa CaMK - GFP , , . ( Leica DM IL) CaMK - GFP . , PIC SHUTTLE , EZTouch Ver. 3. 3. 02. 13 () 25 2 (2002 ) 3 结果 31 PCR PCR 0. 8% , 1. 6kb , cDNA ( 2) . 2 PCR 1, 5: Marke