猪脾转移因子成分分析及活性测定.pdfVIP

维普资讯 山西农业科学 2003，31(4)：87—89 JournalofShanxiAgrie~aralSciences 文章编号 ：1002—2481(2003)04—0087—03 猪脾转移 因子成分分析及活性测定 郑志勇 (山西千汇药业有限公司 ，山西 太原 030031) 摘 要 ：采用超滤 、柱层析组合工艺方式提取转移因子。与传统工艺相 比，这种提取方法可以获得 较高活性转移 因子原液。实验 结果表 明，经 过改进 的提 取方法 使活性 部分 纯度 提 高，经 190 600nm扫描 ，转移 因子洗脱峰为混合物。 关键词 ：转移 因子 ；活性 ；提取工艺 中围分类号 ：$852．4 文献标识码 ：A 随着我 国农业产业结构 的调整 ，畜牧业得到 了快速发展 。我 国养殖产 品出 口中，鸡产 品 占据很大份额 ，但鸡产品出口药残检测很严格 ，成为制约产 品出El的主要 因素。为养禽业提供 安全可靠的预 防和治疗药物很重要 。转移 因子 (TransferFactor，aV)作为一种特定 的细胞 因子 参与机体 的免疫反应 ，它能提高动物机体细胞免疫功能，抵抗真菌、病毒等非细菌性感染 ；同时 有促进 B细胞的抗体分泌作用 ，能够诱导细胞释放干扰素 ，进而促进机体抗感染 、防御能力 。 因此 TF被列为免疫增强剂…。TF是一种低分子多聚核甘酸和多肽 ，对蛋 白酶稳定 ，代谢无药 残 ，是配合禽流感等 由病毒引起的禽病预防和治疗较好的药物 。经 口服或注射 同样有免疫活 性l5j。但传统工艺提取 的猪脾转移 因子收率和纯度较低 ，活性稳定性差 。本研究重点从提高 其收率和纯度这个角度进行探讨 。 1 材料和方法 1．1 实验仪 器和试 剂 超滤器为 Millipore公司产 品(美 国)，SephadexG一25层析柱为珐玛西亚产 品(瑞典)，高压 液相为 Beckman公司产品 (美 国)，试剂为 国产分析纯 。 1．2 猪脾转移 因子 的提取工艺 材料 皆取新鲜时迅速冷冻保存的猪脾 。 1．2．1 传统工艺 脾脏切块后 ，洗涤加入生理盐水 ，再洗涤。绞碎后按 比例加入生理盐水 ，胶 体磨匀浆 。一20一一30~C冰柜过夜 。取 出，室温融化 。如此反复 3—7次 。用 G3漏斗过滤 ，得 转移因子粗提液 。再用截留分子量 10000超滤器，超滤粗提液 2次 ，浓缩 ，即得转移因子原液。 1．2．2 改进工艺 超滤粗提液 同1．2．1。换缓冲液，上葡聚糖凝胶 G一25层析柱 ，收集活性成 分 。合并浓缩得转移因子原液 。 1．3 转移 因子含量和 活性分析 1．3．1 转移 因子含量分析 用二喹啉 甲酸 (BCA)检测法 [引。 - 收稿 日期 ：2003—07—1o 作者简介 ：郑志勇 (1965一)，男．山西定襄人 ．工程师．主要从事微生物 、生化技术研究工作 。 87 维普资讯 山西农业科学 2003年 3l卷第 4期 1．3．2 活性分析 用 白细胞粘附法[31。 1．3．3 结果判定 未粘 附 白细胞抑制指数 (NAI)≥20％判定为活性合格 。 1．4 TF经 190—6OOnln多波段 扫描 表 1 TF含量和活性 TF过 SephadexG．25层 析 柱 ，在 280，254nm紫外检测仪监测下收集各 吸收峰峰顶部分 ，绘 出吸收峰 图。 2 结果 2．1 TF含量及 活性 结果 从表 1可 以看 出，改进工艺 同体 积收集物 rIF含量较传统工艺增加 了0．59mg／ml，抑制指数增加 了 10个百分点。 2．2 TF原液 洗脱