病理组织切片技术是病理实验室最基本的方法.docVIP

病理组织切片技术是病理实验室最基本的方法，是病理学的一项极有使用价值的专业技能。它包括组织固定、脱水、透明、包埋、切片、漂片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明和封固等程序。HE 染色是既基本又十分重要的工作，HE 染色的好坏直接影响病理医生的正确诊断，而HE 染色质量好坏与HE 制片的每一步骤关系都十分密切。只要某一步骤出了问题都直接影响下一步工作，时常会出现个别片子色调不正、颜色对比不协调、染色不匀、模糊不清等现象，使切片的质量和诊断的准确性受到影响。本文作者在实验过程中就制作优良动物病理切片的体会阐述如下： 一、取材要及时、规范 （一）要取最新鲜的材料。由于各器官组织坏死变化很快，所以取材要求迅速。取材时要用锋利的刀片或剪刀，勿用镊子对组织加以压迫，以免组织破裂和变形。 （二）选取组织块的大小、厚薄亦应力求适度。过大、过厚的组织，固定液不宜渗透，亦可造成固定不佳，过小、过薄的组织又可能在固定或脱水的过程中发生扭曲变形情况[1]。 （三）应有代表性，能够反映出组织的基本结构，如肝要有肝小叶；肾要有皮质和髓质；肺要有支气管等。另外，要采取病变部位和健康部位交叉处的组织，这样才可以通过健康部位的对照，清楚地看到各种病理变化。 二、固定要充分 （一）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。笔者常用的固定液是10％福尔马林溶液。应及时固定，这样可保持细胞与生活时的形态相似，防止组织自溶而产生死后变化。将取下的材料立即放在固定液中固定24小时以上，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1~2次新液。目的是防止腐败、保持原有结构并使组织硬化，便于处理。笔者为了让组织块固定充分，常在此步骤增加一步重新修块和重复固定，做法是修块大小为10 mm×10 mm×2 mm，然后放入新配制好的10％福尔马林溶液中固定12小时以上，避免了因固定不充分带来的切片问题，收到很好的效果。材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外贴上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。脱水采用酒精梯度脱水法，让组织块依次经过70%、80%、95%、95%、100%、100%等各级酒精溶液中，脱水必须在有盖的玻璃瓶中进行，防止吸收空气中的水分和酒精挥发，保证脱水彻底。否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象。透蜡温度要恒定，不可忽高忽低；由于作者使用的石蜡溶点为58，所以恒温箱的温度设定为60，保持不变。操作要迅速，力求在最短的时间内完成石蜡透入过程，以免引起组织变硬、变脆、收缩等。作者采用两次浸蜡，每次各15分钟，这样浸蜡较为充分，没有发生组织变硬、变脆、收缩等情况。贴片过程中，用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带，放入38 恒温水浴锅的水面上，注意蜡片光亮平整的一面贴于玻片上，并使之处于稍偏玻片的一端。笔者认为，制片过程的每一步骤都必须认真对待、科学处理，否则就会影响制片质量。一张优良的切片从外观上看要平整、无皱折、无破裂，厚薄适度，分化良好，HE染色对比度好、明亮鲜艳，封胶、标签整洁。只有认真、科学、严谨的对待切片制作的每一个步骤，掌握每一个细节，不断总结经验，才能制作出优良的病理组织切片，为教学、科研提供依据。