肝癌细胞与内皮细胞的粘附力学特性研究.pdfVIP

维普资讯 生物物理学报 第十九卷 第一期 二oo三年三月 ACTA BI()I．H SICA S ICA V01．19 No．1 M ar．2003 肝癌细胞与内皮细胞的粘附力学特性研究 宋关斌 ， 刘保安 ， 秦 建 ， 龙 勉 ， 蔡绍皙 (1．重庆大学生物工程学院，教育部生物力学及组织工程重点实验室，重庆 400044； 2．中国科学院力学研究所，北京 100080) 摘要：采用细胞 同步技术和微 管吸吮技术，从细胞周期的角度研 究不同细胞周期肝癌细胞 (hepatoceUu~ oarcmoreacells。HCC)与脐静脉 内皮细胞~uw c)的粘附力学特性。结果表明，未同步化肝癌细胞各周期时相的 细胞百分 比为：G l期 ，53．51％；G／M 期 ，l1．01％；S期 ，35．48％。采用胸腺嘧啶脱氧核苷 、秋水仙碱顺序 阻断 和胸腺嘧啶脱氧核苷双阻断后释放培养的方法可分别获得G。期和 S期的肝癌细胞 ，其平均同步率分别为 69．02％ 和 96．50％。G。期肝癌细胞与人脐静脉 内皮细胞的粘附力比S期相应值明显降低 (P0．01)，与未同步化肝癌细胞 组 比较也得到 同样结果 ，而 S期与未 同步化肝癌细胞组的粘 附力值无 明显差剐。肝癌细胞与脐静脉 内皮细胞 的粘 附力随着粘附时间的变化而变化 ，在 30～60mm 内迅速增 长，60min之后 维持在较稳定的水平，即3o0xlO0N 左右 。提示 ：在肝癌细胞与 内皮细胞 的粘 附过程 中，S期细胞可能起 的作用更大；肝癌细胞和 内皮细胞上粘 附分 子表达呈现时间效应 。从而体现 出粘 附和去粘 附的行为特征 。 关键词：肝癌细胞 ； 内皮细胞 ； 粘附； 细胞周期 ； 微管吸吮 中图分类号：Q66 文献标识码：A 文章编号：1000．6737(2003)o1．0084．04 肿瘤细胞的血道转移是一个多环节、多步骤的 碱 (colchcme)为 Serva公司进 口分装 ，胸腺嘧啶 复杂过程，其中肿瘤细胞与血管内皮细胞的粘附是 脱氧核苷(thymidine)购 自重庆化学试剂公司。 肿瘤转移的决定性步骤之一，而粘附分子的表达则 1．2 方法 是决定细胞间粘附行为的重要因素 [1】。另一方面， 1．2．1 肝癌细胞的同步化 肿瘤的本质实际上是细胞周期紊乱、细胞失控性生 G．期细胞采取胸腺嘧啶脱氧核苷和秋水仙碱 长所致的一类疾病圈。但肝癌细胞与内皮细胞的粘 顺序阻断后释放培养的方法获得跚，其简要步骤如 附特性及其与细胞周期的关系，尚未见详细文献报 下：取对数生长期的细胞两瓶，加入胸腺嘧啶脱氧 道。为此，本文将细胞力学与细胞生物学有机结 核苷至其终浓度 2mmol／L，在 37℃、5％ C02潮 合，利用微管吸吮技术从周期的角度定量测量不同 湿空气中培养 12h，弃培养液清洗后加入新鲜培养 细胞周期肝癌细胞与内皮细胞间的粘附力学行为特 液和秋水仙碱至其终浓度 l~g／ml。继续培养 征，为进一步阐明肝癌的血道转移机理和肝癌的临 10h，横向轻摇培养瓶收集中期细胞，800rpm离 床预防和治疗提供定量的参考依据。 心 3mm，收集细胞 继续培养 3h和 7h， 以 0．02％ EDTA+0．25％胰酶消化收集细胞，用 5O％冷 1 材料和方法 乙醇固定。 S期肝癌细胞采用胸腺嘧啶脱氧核苷双阻断后 1．1 细胞及试剂 释放培养获得 ，其简要操作步骤如下嗍：取对数生 人肝癌细胞株 SMMC．7721，购于上海第二军