猪圆环病毒检测方法的研究进展.pdfVIP

积的300mmol·L～D一氨基葡萄糖。通常在病料接 与病毒分离、IHC一样能很好地鉴别PMWS与 种后3d，通过IFA、PCR或电子显微镜观察等方 PCV2的亚临床感染 ]。抗原捕获ELISA的建立为 法确认病毒分离情况。病毒分离费时费力，不适 PMWS与PCV2的亚临床感染的鉴别诊断提供了很 于疾病的快速诊断。 好的手段。 2 血清学方法 2．2 间接免疫荧光 2．1 酶联免疫吸附方法 间接免疫荧光(IFA)主要利用已知抗原来检测 酶联免疫吸附方法(ELISA)是以抗体抗原反应 待检血清的抗体，用于病毒分离效果的鉴定及病变 为原理的技术 ，是继免疫荧光和放射免疫技术之 组织或猪源细胞PCV感染情况的检测。陈庆新等 后产生的一种检测抗体或抗原的免疫酶技术 ，该 将浙江省杭州地区28个猪场采集猪血清 1677份用 技术简单、灵敏、快速。血清学方法中最主要的 IFA试验进行PCV2的抗体检测 ，检测出阳性血清 是ELISA法，主要包括竞争ELISA、间接ELISA、 960份，阳性率为55．48％，调查结果显示，杭州地 抗原捕获ELISA等。 区猪场为普遍感染。这种方法成本低、简单、快 2．1．1 竞争ELISA 速、灵敏，但实际操作复杂，因此不适合临床上的 竞争ELISA主要用于测定小分子抗原及半抗 快速诊断。 原。用特异性抗体致敏固相载体 ，加入含待测抗 2．3 免疫组织化学检测 原的样品及一定量的酶标抗原共同培养 ，洗涤除 免疫组织化学检测 (IHC)与IFA一样，也是一 去标记和未标记的抗原，加底物显色。Walker等 种免疫染色方法，是在抗原抗体特异性反应的前提 首次利用PCV1和 PCV2特异性单克隆抗体建立了 下，利用酶细胞化学的手段，检测抗原或抗体的一 竞争ELISA(c—ELISA)方法来检测PCV2抗体 ，并 门新技术。IHC是可以对携带抗原的细胞及组织的 将这种方法和IFA方法相比，检测结果表明，该 形态进行大体的评价，而且在普通显微镜下就可以 方法比IFA更敏感，可用于PCV2抗体的大规模检 进行观察 ，且颜色稳定 ，样本易保存。有学者应 测 1。 ， 用 IHC法对PMWS患病猪的淋巴组织进行了检测 ， 2．1．2 间接 ELISA 发现淋巴组织中单核巨噬细胞 内和组织细胞 内 间接ELISA主要用于测定抗体。用抗原致敏固 PCV2的阳性信号很强，说明PCV2主要存在这些 相载体 ，然后加入待测抗体的血清，培养后洗去 细胞的细胞浆内。 未结合成分 ，再加入酶标抗体 ，洗涤后加入底 2．4 免疫过氧化物酶单层试验 物 ，在酶的催化下底物发生反应 ，产生有色物 免疫过氧化物酶单层试验 (IPMA)是将生长有 质。Nawagitgul等报道了两种间接ELISA法，一种 PCV病毒的PK一15细胞在96孔板上长成单层后 ， 以细胞培养的PCV2全病毒作为抗原(PCV2一ELI． 加入 10倍稀释的待检猪血清 ，作用一定时间后吸 SA)，另一种以ORF2重组杆状病毒表达产物作为 干洗涤，再加入HRP标记的抗猪IgG，37oC孵育 包被抗原 (ORF2一ELISA)，分别用于检测针对全病 30rain，吸干洗涤后加人底物溶液显色，然后终止 毒和病毒核衣壳蛋白的抗体。试验结果显示，ELI— 反应。刘长明等在优化此检测方法的基础上，研制 SA方法敏感性高、重复性好 ，并且与PPV