微生物实验3之革兰氏染色.docVIP

华中科技大学 微生物学实验 报告 班 级： 生物制药1101班 日 期： 2013 年 3 月 16 日 指导教师： 邬建国 实验组别： 启明七组 姓 名： 何明 组员姓名： 张玉涛、王远馨 实验名称： 革兰氏染色 一、实验目的 1.学习并掌握革兰氏染色的方法。 2.简单进行样品的革兰氏染色辨别样品中细菌类别 实验原理 1.革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。 2为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽孢的杆菌和绝大多数球菌，以及所有的放线菌和真菌都成革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都成负反应。 3.革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样，染色与细菌细胞壁的化学组成及结构有关。 4.阳性菌菌体等电点较阴性菌低，在相同pH条件下染色，阳性菌吸附碱性染料较多，因此不易脱去，阴性菌则相反。 三、实验材料 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌；检测样品：含活菌酸奶 染料：草酸铵结晶紫液、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液 其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲苯 四、实验方法 (一)涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫染色（1min）→水洗→路哥氏碘液媒染（1min）→水洗→95%乙醇脱色（30s）→水洗→番红复染（5min）→水洗→干燥→镜检。 关键点：1.严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌； 而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌；2.菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反应。 （二)黑曲霉菌属于真菌,细胞较大,可用水片进行观察,,先在载玻片上滴一滴水,接种,盖上载玻片,即可拿到显微镜下观察. 实验结果与分析 1.对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌分别进行革兰氏染色（拍照，注明放大倍数） 大肠杆菌放大倍数40x 金黄色葡萄球菌，放大倍数100x，油浴 2.对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合涂片进行革兰氏染色（拍照，注明放大倍数） 酸奶中乳酸菌的革兰氏染色（拍照，注明放大倍数） 4.黑曲霉菌水片观察 思考题 你的实验结果与课本中所述是否一致？如果不一致，试分析原因。 答：金黄色葡萄球菌的实验结果与课本描述基本相似，但是用显微镜观察时没有发现大肠杆菌，原因可能是: ①接种时培养基已被大面积划花，菌种很少甚至没有，我们取出的可能只是琼脂；②固定时加热过快，大肠杆菌结构被破坏或冲洗过猛，可能在冲洗时被水冲走，导致最终没有观察到理想结果。酸奶中乳酸菌实验，理论上应有至少5种乳酸菌，但是实验结果只有两种，可能原因是所选视野不合适，高倍镜下观察到的细胞数目有限，或者是固定过热，使样本被破坏。 2.当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确保你的操作正确，结果可靠？如酸奶中乳酸菌的染色。 答：首先需要用碱性染料染色，染色后再水洗，接着脱色，最后用酸性染料染色。 七、实验感悟 1.试验过程中操作一定要小心谨慎，既要把握好染色的时间长短，因为过长与过短都不利于观察，又要吃透原理，这样才不会在实验中出现大的错误； 2. 灭菌过程中一定不要漏掉某些必需的灭菌操作，要时刻注意接种的菌种不恩能够被其它杂菌污染，所以接种的试管口要经常对着酒精灯消毒，并且双手在接种前也要涂抹酒精消毒； 3.染色脱色后用显微镜能观察到不同的菌落有不一样的颜色和形貌，要善于思考为什么不同种类的细菌要用不同的染色剂，哪些类型的可以用同一种，善于归纳总结，这样有助于自身基本实验素质的提高。 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合涂片，放大倍数100x,油浴 酸奶乳酸菌，100x, 油浴 黑曲霉菌水片,40X