果蝇唾液腺染色体的制片与观察.docVIP

果蝇唾液腺染色体的制片与观察 121140083 朱琪璋 一实验目的 1观察果蝇的唾腺染色体，练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法 2观察了解果蝇唾液腺染色体的形态特征 3了解果蝇唾腺染色体在遗传学研究中的意义 二实验原理（预备知识） 1果蝇唾液染色体的介绍 果蝇、摇蚊幼虫唾液腺细胞中的巨大染色体。双翅目昆虫的唾液腺细胞发育到一定阶段之后就不再进行有丝分裂，而永久停留在分裂间期。但随着幼虫的生长，唾液腺染色体仍不断地进行自我复制而且不分开，经过许多次的复制形成约1 000—4 000拷贝的染色体丝，合起来直径达5μm，长度达400μm，比普通细胞中期染色体约大100～150倍，所以又称为多线染色体或巨大染色体。 唾液腺染色体的另一特点是体细胞中同源染色体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋白纤维丝唾液腺染色体是一类存在于双翅目昆虫，如果结合在一起，紧密盘绕。所以细胞中染色体只呈单倍数。黑腹果蝇的染色体数目2n=8其中第Ⅱ、第Ⅲ染色体为中部着丝粒染色体，第Ⅳ染色体和第IX染色体为端着丝粒染色体。唾液腺染色体形成时，染色体着丝粒和近着丝粒的异染色质区聚于一起形成一个染色中心，所以在光学显微镜下可见从染色中心处伸出6条配对的染色体臂，其中5条为长臂，l条为紧靠染色中心的很短的臂。 唾液腺染色体经染色后，呈现深浅不同，疏密各异的横纹。这些横纹的数目，位置，宽窄及排列顺序都具有物种的特异性。研究认为这些横纹与染色体的基因是有一定关系的。通过一定的实验方法使果蝇唾液腺染色体各臂分散开，并且使带纹、膨突等特征不受杂质影响清晰地显示出来，是进行果蝇遗传学研究的很重要的一个环节．果蝇唾液腺染色体在不同种间的共同点是染色体的着丝点位于一个染色区域，但不同的种类往往其染色体臂数目不同．每条染色体臂上分布着染色深浅不同、粗细各异的磺纹，这些横纹的宽窄疏密程度以及排列顺序和数目又都有种的特异性和种内的差异．由此，果蝇唾液腺染色体近几十年来，已广泛用于种内系统发生和种间亲缘关系的研究中，因为种间及种内不同品系和近缘种中的遗传差异经常反映在唾液腺染色体的不联会、形成泡、缢虞和间带区的伸缩性以及顶体的形态等多方面的差异，而特别重要的是研究它的基因序列的差异(观察是否产生了例位以及染色体的断裂、融合和重排)。因此，无论从细胞遗传学的角度研究基因与突变性状之间的联系，还是从进化遗传遗传学方面研究染色体的系统发生，探讨种间以及近缘种间的遗传差异和生殖隔离的机制等，唾液腺染色体的分析研究都是十分重要的．从其横纹分布特征可对物种的进化特征进行比较分析，而一旦染色体上发生了缺失，重复，倒位。易位等结构变化，也可较容易地在唾液腺染色体上观察识别出来。 2拉唾液腺的操作方法图示 三实验材料与器材 仪器设备：双筒解剖镜，显微镜，恒温培养箱，镊子，解剖针，载玻片及盖玻片，吸水纸 材料:黑腹果蝇三龄幼虫 试剂：醋酸洋红染液，蒸溜水，1NHCL，生理盐水 四实验步骤 1材料准备 发育充足、肥大的三龄幼虫，唾液腺和唾液腺细胞发育良好。利用这样的唾液腺细胞才能制备出理想的染色玻片标本。因此要求培养基营养丰富，含水量较高。比较松软，发酵良好。  2实验示意图 ①分离出的果蝇唾液腺 ②染色后的果蝇唾液腺染色体 六注意事项 1.果蝇幼虫应尽量选取大而肥的。 2.唾液腺在解剖镜下是透明的“香肠”状，注意同幼虫的肠道区别开。 3.注意要仔细剔除唾液腺旁的脂肪，由于唾液腺很容易“破”，所以要非常小心。 4.注意在染色时千万不能让唾液腺暴露在空气中，或是让装片“干”掉。 5.在压片时，要使劲压，这样才能使染色体舒展开来，便于观察。 七问题讨论 1.何谓先染色体？ 答：一种缆状的巨型染色体，见于有些生物生命周期的某些阶段里的某些细胞中。由核内有丝分裂产生的多股染色单体平行排列而成。各染色单体上的染色粒（见灯刷染色体）并排排列，构成多线染色体的带，带与带之间则称间带。多线染色体的这种结构可用光学显微镜观察，也能在多线染色体上用原位分子杂交法进行基因定位，并就其结构与功能之间的关系进行系统研究，因此是细胞学和遗传学研究的有用材料。 核内DNA多次复制产生的子染色体平行排列, 且体细胞内同源染色体配对, 紧密结合在一起, 从而阻止了染色体纤维进一步聚缩, 形成体积很大的由多条染色体组成的结构叫多线染色体。多线化的细胞处于永久间期, 体积也相应增大, 它存在于双翅目昆虫的幼虫组织内, 如唾液腺、气管等。 2.如何区别你看到的就是唾腺染色体？ 答：1由于在唾液腺细胞中8条染色体之间以着丝粒互相连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的假联会，经碱性