细胞与组织化学.ppt

目录 第一章 概 述 第二章 组织学的研究方法 第三章 光镜标本制作 第四章 光学显微技术 第五章 组织细胞化学 第六章 免疫组织细胞化学 第七章 原位杂交组织化学 第八章 细胞分离技术 第九章 细胞培养与组织工程 第十章 形态计量分析术 第一章 概 述 第一节　概述 第二节　组织细胞化学的发展史 第一节　概述 1.组织化学和细胞化学 组织化学是研究整个组织，而细胞化学是研究单个细胞。细胞和组织化学中的科学技术为细胞和组织中定位特定的化合物提供了方法。 Eg. 组织切片与目标酶的底物一起孵育，这一反应的产物与存在于孵育混合物中的色素发生反应。如果样品在孵育前固定的很好，且固定过程没有对酶造成损伤，那么这个过程将会使组织薄片中含酶的细胞在显微镜下显现。若显微镜具有更高的分辨率，还可以将含有该酶的亚细胞器显现。 组织化学（histochemistry)和细胞化学（cytochemistry）技术的基本原理是在组织切片上或被检材料上，加一定试剂，使它与组织或细胞中待检物质发生化学反应成为有色沉淀物，以用光镜观察，若为重金属沉淀，可以用电镜观察，称电镜组织化学（electron microscope histochemistry)。这种方法可用于检测细胞内的酶类、糖类、脂类。核酸与某些多属元素等。如进一步应用显微分光光度计等测定标本中沉淀物的强度，则能较精确地进行定量研究。 2. 研究组织、细胞传统的化学方法 3．现代意义的细胞与组织化学 包括电镜细胞化学,免疫细胞化学,显微放射自显影,流式细胞术,细胞染色体DNA原位杂交，胞内ca2 +测量等。细胞是一个生命体，组织的构成也是由细胞组成，在研究生命规律及探索生命规律的过程中，要应用到许多技术和方法，从而产生了组织和细胞化学等学科。 第二章　组织学的研究方法 第一节　概述 第二节　组织学制片概述 第三节　取材和固定 第四节　固定后的处理 第五节　染色及染色方法 第一节　概述 　 组织学（histofogy）是应用显微镜研究机体微细结构及其相关功能的科学，是在解剖学的基础上从宏观到微观发展形成的，故又被称为显微解剖学（microscopic anatomy）。 组织学的研究内容，首先要研究组成机体的形态结构与功能单位——细胞；继而 研究在细胞及其产物所组成的基本组织（primary tissue）——上皮组织。结缔组织、肌肉组织和神经组织；在此基础上研究各器官系统的微细结构及其有关功能. 第二节 组织学制片概述 1.组织学制片方法 非切片法 直接取物体进行观察，不用切片机，不经切片手续而制成切片的方法。 包括： a.整体封藏法 eg 水螅 鸡胚 蛙胚 b.涂片法 针对液体或半液体。 Eg 血液 骨髓 腹水 c.活体标本观察法 eg 蛙口腔黏膜的纤毛运动 细胞吞噬 d.分离法 eg　分离三种肌细胞　神经纤维　脊髓前角神经细胞 e.铺片法 eg　肠系膜　可观察肥大细胞　弹力纤维　胶元纤维等　 f.磨片法 eg　骨组织或牙齿　 切片法 需依靠切片机将组织切成薄片的方法。 第三节　取材和固定 1.取材与固定（组织切片制作的关键步骤） 取材：首先动物组织需从动物体中取出。方法有多种,主要是视材料的种类，实验动物个体大小及观察的目的而定。 杀死的方法：大的个体(实验动物)用刀，斧头，麻醉等方法. 小的个体（实验动物）采用大号剪刀或断头法等。 取材注意事项：取材需速度快，取材以后，应立即进行固定。否则细胞会自溶。 鱼杀死后2小时再烹调比刚处理完就烹调的味道要更鲜美。这是细胞自溶导致的结果。 第四节 固定后的处理 1.洗涤 洗涤的目的 组织在固定后一定要把渗入组织里面的固定液洗去，然后进行下一个过程，为防止组织中留有较多的固定剂影响脱水剂，甚至可在组织中发生沉淀或结晶而影响观察，特别是对陈旧性标本更应注意流水冲洗，尽可能减少组织中的酸性程度和甲醛色素。对于混合性固定液，更应及时洗涤，有利于脱水，切片和染色。 洗涤的方法 1．固定剂以水配置者 用流水冲洗，可使组织中固定液随时溢出和随时洗去。 大的动物组织冲洗时间为24小时左右，小动物组织冲洗时间为2-10小时。 冲洗的时间基本根据固定的时间而定,新鲜的标本固定时间短,需及时脱水者,冲洗时间短.固定时间短。 2 固定剂含乙醇者 一般不要求冲洗，如需冲洗必须采用与固定剂溶度相近的乙醇冲洗。 3 特殊固定液洗涤法 1）重铬酸钾 流水冲洗12-24小时，或