吸附固定相开管毛细管电色谱—管壁吸附的利弊及作用.pdfVIP

CE．017 吸附固定相开管毛细管电色谱 一管壁吸附的利弊及其作用 刘 震 邹汉法 叶明亮倪坚毅张玉奎 (中国科学院大连化物所国家色谱研究分析中心大连116011) 1 前言 毛细管管壁的吸附作用在毛细管电泳(cE)中通常被认为是不利的因素。溶质，尤其 是蛋白质和肽在管壁上的吸附，常常导致一系列不利的影响，如峰形拖尾、基线不稳、迁 移时间变化、柱效降低、回收率损失，甚至柱寿命降低等等，因此在cE中，通常认为应 最大限度地降低溶质吸附。尽管如此，管壁吸附作用仍具有有利的一面，例如，利用阳离 子表面活性剂在毛细管管壁上的吸附双层可以改变电渗流的方向。也就是说，传统观念中 的不利因素，如果利用合理，可以转变为有利的因素。即然阳离子表面活性剂、蛋白质和 肽等化合物极易吸附到毛细管管壁上，是否可以将这些物质在管壁上的吸附层作为开管毛 细管电色谱(OwEc)的固定相?为此，我们考察了阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴 化胺(CTAB)和碱性蛋白质溶菌酶作为固定相的可行性。结果表明，这两类物质均可作为 oTCEc固定相，从而成功地发展出称之为“吸附固定相开管毛细管电色谱”的新方法。 在此基础上．我们已将固定相物质扩展到更宽的范围，包括阳离子表面活性剂(cTAB)、 碱性蛋白质(溶菌酶和细胞色素c)、碱性小肽(赖氨酸一酪氨酸和赖氨酸-丝氨酸-酪氨酸)和 碱性氨基酸(L-赖氨酸)。 2实验 2．1仪器 Beckm卸P，ACE5010· system 2．2固定相制备步骤 毛细管活化后，首先用含有固定相物质的缓冲溶液冲洗毛细管一定时间，然后用不含 周定相物质的缓冲溶液冲洗毛细管一定时间，以便将未被吸附的固定相物质冲洗出毛细 管。对于CTAB吸附固定相，制备周期小于10min；而对于吸附手性固定相．制备周期小 于60min。 2．3实验条件 采用细内径毛细管(1肛25um)．流动相为磷酸盐溶液，浓度较低(10mmol，L)，pH值 适中(6．86或7．20)，为了调节电渗流和溶质与固定相间的相互作用。在流动相中加入适 量的异丙醇。 3结果与讨论 3．1吸附量的表征 um 采用前沿分析法测定了C1‘AB和溶菌酶的吸附量。cTAB在40cm(有效长度)×lO 500个cTAB分子，um i．d．毛细管上的总吸附量为5．22×lO“mol(相当于2 2)，而溶菌酶 ．826． ooo个 在30cm(有效长度)×25umi．d．毛细管上的总吸附量为4．2l×lo“2moI(相当于107 溶菌酶分子，pm2)。 3．2吸附cTAB固定相分离中性化合物(见图1) 0 3 0 O b3 O O ．肌： ．‘N， 厂^ O 0 一J O l 2 3 4 5 6 O l 2 f√min “mln 图1吸附cTAB固定相分离烷基苯同系物(a)和硝基苯胺异构体(b) 毛细管：A，47cm(至检测器40cm)×10umi．d．：B．27cm(至检测器20cm)×25umi．d．。流动