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日本鳗鲡腐皮病病原菌的分子生物学鉴定.pdf
第33卷第2期 福 建 水 产 V01．33NO．2
2011年 6月 JOURNALOFFUJL FISHE Jun．2011
文章编号：1006—5601(2011)02-0033-06
日本鳗鲡腐皮病病原茵的分子生物学鉴定
童文婷
(福清市海洋与渔业局，福建 福清350300)
摘要：福清市水产技术推广站从患腐皮病的日本鳗鲡上分离到 1株病原菌Ms37101NG，经人工感染试
验确定为致病菌。同时菌株Ms37101NG经常规生理生化鉴定属于气单胞菌属。为了进一步确定其分类地
位，本试验采用了分子生物学的鉴定方法，测定了菌株Ms37101NG的16SrRNA基因部分序列。16SrRNA基
因系统进化分析表明，菌株Ms37101NG与AY987744 (Aeromonasveronii)的16SrRNA基因的同源性最高为
96％，表明菌株 Ms37101NG与维罗纳气单胞菌 (Aeromonasveronii)的亲缘关系最近。综合上述试验结果，
菌株Ms37101NG可鉴定为维罗纳气单胞菌。
关键词：It／本鳗鲡；腐皮病；16srRNA；系统进化
31本鳗鲡 (AnguillajaponicaTemmincket 菌株 Ms37101NG由福清市水产技术推广站
Schlege1)腐皮病是一种常见的细菌性疾病，也 提供，分离 自患腐皮病的13本鳗鲡，经人工感染
是鳗鱼病害中发病率最高、波及范围最广、危害 试验验证为腐皮病病原菌。
最大的一类疾病，每年 5—9月份是其暴发 1．1．2 试剂
期H J。腐皮病又称腐烂病，流行季节长，尤其 10 x PCR 缓 冲 液，25mmol／L Mgcl2，
是夏季发病率高，危害性大。发病初期，可见受 10mmol／L4xdNTPs(Sangon公司)，5U ·l一
伤皮肤充血而红肿 ，由于疼痛，行为表现极度不 1TaqDNA聚合酶，模板DNA，超纯水。
安，继而皮肤发生坏死，呈 白色或黄色，接着患 用于 16SrRNA基因PCR扩增的正向引物为
部崩溃成溃疡，随着溃疡的增多与扩大，露出肌 27F：5’一AGAG1’ITGATC(C／A)TGGCTCAG一
肉与骨骼，此时患病体不吃不动，严重时受病菌 3’(对应于E．coli16SrRNA基因的第8—27个碱
的毒素侵害而中毒身亡。剖检尸体，可见全身内
基位置)；
脏充血肿大。 反向引物为 1492R：5’一TACGG(C／T)TAC．
笔者从福清市水产技术推广站从患腐皮病的
CTTG丌AlCTr一3’(对应于 E．colil6SrRNA基 因
日本鳗鲡上分离到 1株病原菌，在常规生理生化
的第 1492—1510个碱基位置)。
鉴定的基础上，测定了从患病 日本鳗鲡上分离的
1．1．3 主要仪器
病原茵的16SrRNA序列，构建了系统发育树，
PCR仪 (2720ThermalCycler，ABI)；
分析了相关细菌的同源性，最终确定了腐皮病病
电泳槽 (HE33，AmershamBiosciences)；
原菌的分类地位，为今后进一步研究鳗鲡腐皮病
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