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高密度微阵列细胞检测：单细胞分析的造血干细胞在外周血单个核细胞Masahito Hosokawa , Atsushi Arakaki , Masayuki Takahashi , Tetsushi Mori , Haruko Takeyama and Tadashi Matsunaga *Department of Biotechnology, Tokyo University of Agriculture and Technology, 2-24-16 Naka-cho,Koganei, Tokyo 184-8588, Japan ,Anal. Chem., 2009, 81 (13), pp 5308–5313DOI: 10.1021/ac900535h 出版社：Publication Date (Web): June 1, 2009Copyright ? 2009 American Chemical Society 摘要检测与隔离的特定类型的细胞从有限的生物样本已成为一个重大挑战，临床诊断和细胞生物学的研究。在这里，我们报告的高密度微阵列的靶细胞检测成千上万的单细胞整齐排列到10?000微腔效率高约90%的负载细胞。特异性免疫是完全确定的单细胞水平的测量荧光强度的细胞标记抗体靶向细胞表面标志，和纯度的造血干细胞（造血干细胞）在人外周血分析了该系统与所取得的常规流式细胞仪。此外，基因表达干细胞标记，CD 34，决心从造血干细胞的分离单个细胞使用的是微操作机器人。这项技术已被证明是一个有效的工具，检测靶细胞和随后的细胞在单细胞水平的分析研究。技术检测和隔离特定细胞的兴趣异种人口始终是需要在该领域的细胞分析。（1，2）造血干细胞（造血干细胞）已特别重大的目标（3，4）由于其深刻的再生能力和维持生产的所有造血谱系的寿命个人和已被广泛研究，在医学上的应用移植到患者的血液系统恶性肿瘤和实体肿瘤。（5，6）迄今为止，流式细胞仪已成为一个关键技术，使高通量枚举和孤立的细胞为造血干细胞，以免疫分析用荧光标记抗体或其他标记分子（7。，8）然而，虽然知道是非常适用的，尺寸，成本，并且需要训练有素的人员有约束的研究人员利用这种技术。此因，最近企图便宜和小型设备有促进发展和应用的哺乳动物细胞介导的微分析装置。结合各种先进的功能，包括环境控制，夏令时间尺度的测量，图像处理，（9）这样的组合装置与阵列为基础的平台，用于细胞压迫，进一步允许直接成像的大细胞阵列进行调查的机会，研究细胞生物学上的单细胞水平。（13，14）此外，分离被困的靶细胞使用技术如光散射力，（15）微（16，17）和micropallet（18）也有助于检索的靶细胞从这些设备。然而，目前的阵列为基础的微器件的挑战低细胞包封效率，其中许多这些设备需要额外或过度负荷细胞是不利于检测和分离靶细胞和高通量分析。最近，我们介绍了一个高效率的细胞压迫平台即模型哺乳动物细胞成功地包埋到100的微结构。（19，20）在这项工作中，我们描述的发展，高密度微阵列10?000腔，这是专为高效率的单细胞诱捕和应用在检测和隔离CD 34 +造血干细胞，构成不到0.15%的总人口的外周血单个核细胞（单核细胞）在正常个体。（21）单一的CD 34 +细胞完全确定从人外周血单个核细胞的形象和基因表达分析。这种技术，因此，显示高潜力作为廉价和简单的工具，图像为基础的免疫和确定具体的细胞类型，包括干细胞，祖细胞，与肿瘤细胞。结论在这项研究中，高密度微阵列设计与应用作为一个工具，用于检测特定的靶细胞或细胞群。这项技术，被证明是简单，可靠，和高效率的细胞压迫，使表型分析在单细胞水平评价的基础上，细胞表面标志的表达通过微观分析，即单一的检测CD 34 +造血干细胞从外周血单个核细胞，分离，和基因表达分析成功证明。因此，我们深信我们的微阵列技术将不仅作为一个重要工具，检测和分离靶细胞也作为一种廉价而有效的方法适用于细胞分析有助于重点研究领域包括细胞?细胞相互作用研究以及药物筛选。High-Density Microcavity Array for Cell Detection: Single-Cell Analysis of Hematopoietic Stem Cells in Peripheral Blood Mononuclear Cells Masahito Hosokawa , Atsushi Arakaki , Masayuki Takahashi , Tetsushi Mori , Haruko Takeyama and Tadashi Matsunaga *Department of Biotechnology, Tokyo University of Agriculture and Technology,