灵芝多糖水飞蓟素改善不同程度肾小球内皮细胞氧化应激损伤的Sirt1调节机制研究.pdfVIP

LISHIZHENMEDICINEANDMATERIA MEDICARESEARCH2013VOL．24NO．1 时珍国医国药2013年第24卷第1期 灵芝多糖、水飞蓟素改善不同程度肾小球内皮细胞氧化 应激损伤的Sirtl调节机制研究 赵旭，郝传铮+，徐俊伟，胡 平 (南通大学附属医院，江苏南通226001) 各组细胞Sirtl基Ig水平，蛋白免疫印迹法(Westernblot)测定各组蛋白表达水平；95“moL／LH202损伤时，慢病毒颗粒转 SHRNA后M 导Sirtl rITI法测定各组细胞活力。结果80斗moL／L 芦醇组=模型对照组灵芝多糖组=正常对照组，Sirtl蛋白表达为模型对照组白藜芦醇组灵芝多糖组=水飞蓟素 组=正常对照组；H：O：浓度95“moL／L时，各组细胞活力依次为：灵芝多糖组水飞蓟素组白藜芦醇组=模型对照组。 结论一定程度氧化损伤下，机体自我修复作用可能与主动上调Sirtl表达有关；氧化损伤时细胞存活率与Sirtl表达非线 性关系，SirtlmRNA和蛋白表达水平也不尽一致；灵芝多糖、水飞蓟素、白藜芦醇对Sirtl的影响不同。 关键词：灵芝多糖；水飞蓟素； 肾小球内皮细胞；氧化应激；Sirtl DOI标识：doi：10．3969／i．issn．1008-0805．2013．01．060 中图分类号：R284．2文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2013)01-0137-03 目前认为，氧化损伤可能是人体衰老及各种重要疾病诸如肿 复旦大学肾脏病研究所提供。 瘤、糖尿病、心脑血管疾病、神经退行性病变等最主要的危险因子 之一。1。药理学研究证实，灵芝多糖(GLPs)对机体有免疫调节、 抗衰老、抗肿瘤、护肝、降糖、降脂等广泛作用213，而近年研究发仪，Applied 统(BIO—RAD公司，IQ一5型)。 现水飞蓟素(Silymarin)除可对肝脏起到保护作用之外，也具有抗 肿瘤、抗炎、降血脂、治疗糖尿病等用途4。本研究即以灵芝多 2方法 2．1 糖和水飞蓟素为研究对象，将沉默基因同源蛋白1(Sirtl)激动剂细胞培养小鼠。肾小球内皮细胞在倒置显微镜下观察呈多 角形或长梭形，核淡，胞膜明显，细胞呈单层。小鼠肾小球内皮细 白藜芦醇(Resveratrol，Res)作为阳性对照，以期多层面揭示灵芝 胞完全培养基由含有10％胎牛血清、90％RPMI1640组成，将细 多糖、水飞蓟素对氧化损伤的防治作用及其对Sirtl的调节机制， d左右传代一次， 为氧化损伤相关疾病研究提供新的思路。 胞置于37。C，5％CO，的培养箱中进行培养。3 1材料与仪器 取第3代细胞供实验用。 1．1细胞株小鼠肾小球内皮细胞株由复旦大学肾脏病研究所2．2 药物干预对较低程度氧化应激损伤细胞的Sirtl调节实验 提供。 2．2．1MTr法检测低浓度H：0：损伤下各药物对细胞活力影响 1．2用药物及试剂高纯度灵芝多糖(上海绿谷集团有限公司，取上述培养的细胞接种于96孔培养板中，实验共分10组(即：正 批号纯度98％)；低纯度灵芝多糖(东方植物保健科常对照组，模型组对照组，灵芝多糖高纯度低、高浓度组，灵芝多 糖低纯度低、高浓度组，水飞蓟素低、高浓度组，白藜芦醇低、高浓 技有限公司，批号纯度10％)；益肝灵片(上海朝晖药 业有限公司，每片含水飞蓟素38．5mg，批号：国药准字 h