牛血清蛋白稀溶液的粘度研究.pdfVIP

牛血清蛋白稀溶液的粘度研究1 1 1 1,2 李艺 ，蔡正春 ，程镕时 1 南京大学化学化工学院，南京 (210093) 2 华南理工大学材料科学与工程学院，广州 (510640) E-mail：rscheng@ 摘 要：本文测量了15-40℃之间不加盐的牛血清蛋白水溶液的粘度随浓度的变化，发现： 牛血清蛋白是一种“硬蛋白” ，从特性粘数估算出的分子尺寸随温度的变化很小，它在毛细管 玻璃内表面的吸附量很低。自缔合常数在所有温度下都为零，证实了它难于聚集的特点。牛 血清分子吸附后会发生构象变化，表现为分子变“扁”。当温度降低吸附量增大后，吸附层的 厚度出现了先减小后增大的现象，考虑到牛血清蛋白在界面以单层吸附为主的特点，我们推 测由于分子在界面上随着温度降低进一步铺展，导致吸附层的平均高度降低。其后吸附层的 厚度的增大是由于单层吸附量达到最大饱和值后开始出现多层吸附所致。有效吸附层厚度远 大于分子在溶液中的尺寸，是由于分子之间存在库仑斥力，导致吸附分子和流动分子之间存 在一个排斥层。 关键词：粘度，牛血清蛋白，吸附 1. 引言 血清蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质，也是研究得最多的蛋白质之一。早期人们通过 流体力学和小角光散射实验假定牛血清蛋白分子的结构为扁平的椭圆体，尺寸为140 × 40Å。 分子的二级结构中包含68%~50%的α螺旋和16% -18%的β折叠。但是后来的核磁共振和X-射 线结晶数据显示牛血清蛋白分子更像是心型结构，天然血清分子的结构中包含55%的α螺旋 和45% 的无规线团，不含有β折叠。加热后分子中的α螺旋含量降低，同时生成β折叠（65℃ 以上）。BSA分子中包括三个同源的区（I，II，III ），含17根双硫键，但是这些区所带的电荷 是不同的，图1为pH 中性时BSA分子的结构示意图[1] 。BSA分子的一级结构电荷分布不均匀， 但是BSA分子的三级结构的电荷分布是相当均匀的。与其它蛋白质相比，由于牛血清蛋白较 少出现聚集，因此经常作为理想的硬球模型来研究在化学变性中的折叠和伸展行为[2] 。 Peter[169]等曾报导BSA 的特性粘数值为3.7~4.2ml/g，但是随着双硫键分裂的增加，特性粘数 值会增大，而流体力学分子轴比会从4大约上升到9 。BSA溶液的粘度随浓度增加线性增大， 直到浓度6.5mg/ml后开始呈指数级的增长。 图 1 牛血清蛋白分子结构示意图 Fig. 1 Structure of BSA molecule 本文测量了不同温度下不加盐的牛血清蛋白水溶液的粘度随浓度的变化，并利用有浓度 校正的粘度公式 1[3-6]， 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20030284003 ）的资助。 -1- 2 ⎛ C ⎞ + ⋅ + ⋅ ⋅ ⋅ ⋅ + ⋅ − (1 [η ] C 6 K m [η ] C ) ⎜1 k ⎟ 1 ηsp ⎝ Ca +C ⎠ （1） C C 从实验粘度数据得到牛血清蛋白的粘度参数。