第三节第一节 外植体的脱分化.pptVIP

第一节 外植体的脱分化 李琳莉 脱分化 指已分化的外植体细胞（组织、器官），在切割损伤和培养物内外因素作用下，逐渐丧失其原有的分化的结构和功能，合成代谢变得旺盛、细胞壁由厚变薄，其内部结构也发生变化，细胞高度液泡化，形成无组织的细胞团或愈伤组织 再分化 指离体培养物由脱分化状态再度分化的过程 在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织的形成和形态的发生 外植体的细胞应激于损伤和离体培养而出现的脱分化，是培养物细胞在结构上可见的第一个变化 脱分化的细胞在一定的条件下可进行不断的分裂和生长 也可不经分裂而直接再分化为其他类型的细胞或胚状体 一、诱导期间的细胞脱分化过程 变化的总体特征： 细胞质显著变浓，大液泡消失，核体积增加并逐渐移位至细胞中央，细胞器增加 液泡蛋白质的出现和质体转变为原质体被认为是细胞脱分化的重要特征 脱分化的三个阶段 1、启动阶段 表现： 细胞质增生，并开始向细胞中央伸出细胞质丝，液泡蛋白出现 2、演变阶段 细胞核开始向中央移动，质体演变成原质体 3、脱分化终结阶段 细胞回复到分生细胞状态，细胞分裂即将开始 二、与脱分化有关的因子及其作用 1、损伤刺激 ————————引起脱分化的首个因子 导致外植体产生生化反应：气体交换率变化，实际上，也导致呼吸活性的变化 将马铃薯块茎组织做成薄片（1~2mm）,随着切断后的时间的推移，呼吸速度增加。马铃薯、胡萝卜和菊苣等贮藏组织在20~24h似乎达到最大的呼吸速度，故称之为“损伤呼吸” 损伤呼吸的形成与诱发前的是相异的 导致很多其他酶活性的增加 如菊 苣中的抗坏血酸氧化酶、磷酸酶、ATP酶，转化酶、 马铃薯中的6-磷酸葡萄糖（酸）脱氢酶和异构酶、丙酮酸激酶等活性均增加 2、培养细胞的异质性 用茎、胚轴等典型的各种已 分化的细胞类型的复 合物作外植体，细胞之间存在很大的异质性，异质性细胞对培养条件刺激有不同的敏感性。 因此只有 某种类型或某一部分的细胞能够脱分化以至分裂，其他的细胞则不能。 特别值得注意的是异质性的两个方面是不同的倍数体和不同的生理状态 3、生长物质的影响 切面很容易形成多酚物质沉积的保护层，从而又可使表层细胞停止分裂 但如加入2,4-D等生长物质，则可导致外植体在细胞生物学上与细胞分裂有关的一些强烈变化，可使进入第一次分裂的细胞百分率更高 加入生长素的同时如 3、生长物质的影响 切面很容易形成多酚物质沉积的保护层，从而又可使表层细胞停止分裂 但如加入2,4-D等生长物质，则可导致外植体在细胞生物学上与细胞分裂有关的一些强烈变化，可使进入第一次分裂的细胞百分率更高 加入生长素的同时如配合激动素效果更好 4、光线的影响 光线对外植体的最初的细胞分裂有明显的影响 外植体在DNA复制开始后，对光线表现不敏感 在后续的培养期间，光线对生长也很少有刺激作用