GRIM-19在卵巢癌细胞株中的高表达及其意义.pdfVIP

GRIM一1 9在卵巢癌细胞株中的高表达 及其意义 李敏1，周颖1。彭程1，冯定庆1。蒋丽莎1，凌斌h。肖卫华2 (1安徽医科大学附属省立医院妇产科分子实验室、安徽省分子医学重点实验室，安徽合肥230001； 2中国科技大学生命科学院) [摘要] 检测GRIM．19及其下游基因信号转导和转录激活子3(STAT3)的表达，运用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖情况。 卵巢癌细胞株的增殖，并且下调STAT3的表达。 [关键词] GRIM．19；信号转录和转录激活子3；SK·OV·3／GRIM-19 [中图分类号]R737．31[文献标识码]B [文章编号】1002-266X(2009)ol-0078-03 oC GRIMs是最近发现的一群参与干扰素(IFN)／mg／L的氨苄青霉素和链霉素，375％CO：饱和 维甲酸(RA)联合诱导细胞凋亡的基因，是Kalvako—湿度下培养。嘌呤霉素购自美国Invitmgen公司，经 lanu…应用反义RNA敲除技术在乳腺癌细胞中筛 生理盐水配成25 oC保存备用。氯喹购自 mg／ml，4 选鉴定，并首先报道的凋亡蛋白。GRIM．19是 mmol／L，4℃保存备 Sigma公司，经生理盐水配成25 GRIMs家族成员之一，在多种正常组织中表达。信用。STAT3抗体购自Cell 号转导和转录激活子3(STAT3)在卵巢癌中持续性 Santa Cluz公司。 活化，表达水平明显增高，可促进肿瘤细胞增殖、侵 1．2方法 袭转移及免疫逃逸，抑制其凋亡旧J。研究报道，在 1．2．1 SK．OV-3的培养与转染对数生长期SK— 前列腺癌中GRIM．19表达下调，而STAT3的表达相 应升高。GRIM．19被认为是STAl3表达和激活的 5AMedium 级胎牛血清的McCoy’s Modified培养液 阴性调节子。目前，GRIM一19在卵巢组织癌变的具 培养，细胞80％融合时进行转染。转染按照Lipo- 体作用机制尚不清楚∞J，2008年3～5月，本文将高 h后更换完全培养 fectAMINE2000说明书进行，5 表达GRIM一19的重组质粒转染人人卵巢癌细胞株 液，24h后更换含嘌呤霉素的完全培养液筛选培 (SK-OV-3)中，以了解GRIM一19对卵巢癌细胞的增 养，每3～4d换液1次，约20d后筛选成活并完全 殖及其下游基因表达的影响。 汇合的细胞进行传代培养。转染的细胞株为sK· 1材料与方法 1．1 材料pIRES2一Puro—myc—GRIM一19质粒、pIRES SK．OV-3／Control细胞株(对照组)。 2-Puro．myc对照质粒、GRIM．19抗体(鼠抗人单抗) V．Kalva- 均由美国马里兰大学肿瘤研究中心Dhan kolanu教授惠赠。脂质体Lipofect2000、总RNA提