JSRV衣壳蛋白单克隆抗体的制备及免疫学鉴定.pdfVIP

PI臼13豢瓣‰…记s www．pibb．ac．cn JSRV衣壳蛋白单克隆抗体的制备及免疫学鉴定木 罗军荣1，2’ 斯日古楞-’ 刘霄卉1’ 周建华砷 马学恩1’“ r-)内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特010018；姐西农业人学动科院，南昌330045： 3)中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨150001) 合．最终获得了三株稳定分泌单克隆抗体的细胞系．同时，分段克隆绵羊肺腺瘤病毒ca基凶并构建原核表达质粒，在 blot对分段表达 E．coliBL21中诱导表达．以获得的三株抗JSRV．CA蛋白的单克隆细胞分泌的McAb为一抗，应用Western 的CA蛋白进行肽探针扫描，初步鉴定了三株单抗识别的线性表位，并心用非竞争性ELISA法测定了二株单抗的功能性亲和 常数．为建市特异性的病原诊断方法、分析CA蛋白的功能及疫苗设计奠定了基础． 关键词绵羊肺腺瘤病毒，表位，衣壳蛋白，抗体亲和力，单克隆抗体 学科分类号Q7，$852．4．3 DOI：10．3724／SP．J．1206．2008．00339 adenomatosis，是JSRV的标准抗原【78】．更令人惊讶的是，人类肺 绵羊肺腺瘤病(ovinepulmonary 癌与JSRV相关蛋白的抗体有抗原交义反应，30％ OPA)义名“驱赶病”(Jaagsiekte)，是引起绵羊肺 脏肿瘤的一种接触性传染病，也发生丁山羊．绵羊 的BAC病例及26％的肺腺癌病例的病料能被抗 肺腺瘤病病毒(Jaagsiekteretrovirus，JSRV)为病原， 属于B反转录病毒，为线性单股正链RNA，全长现与JSRV相关的序列存在于非洲健康人群及HIV 7．4 阳性人群的基因组中，但调查的几例肺癌患者中没 kb，编码相互重叠的gag、pro、pol、enV基 因【1】．该病最早于1825年报道于非洲，主要病征有发现相关的序列． 为患羊咳嗽、呼吸困难、消瘦、大量浆液性鼻漏、 鉴丁以上情况，本研究以纯化的CA蛋白为抗 Ⅱ犁肺泡上皮细胞和无纤毛细支气管上皮细胞肿瘤 原，筛选制备稳定分泌抗JSRV．CA单克隆抗体的 性增生[2~41．OPA与人的细支气管一肺泡癌 细胞系，并应用Pepscan技术，通过表达连续的重 叠短肽，与特异性单克隆抗体反应，经Western (bronchiolo—alveolarcarcinoma，BAC)在临床症状、 影像学及病理组织学特征方面极为相似，为人类这 blot检测，确定阳性反应片段，从而初步鉴定了三 一常见癌症提供了研究模型四． 株单抗识别的线性表位，并应用非竞争性ELISA OPA主要发生于欧洲、美洲、非洲、东南亚 法测定了i株单抗的功能性亲和常数．此项研究将 等地区，几乎所有的养羊业发达的国家和地区，包 有助丁分析CA蛋白的分子特性及生物功能，为今 括我国新疆、内蒙古等地都有该病的发生和流行， 后了解OPA与人类肺癌的关系及应用抗CA蛋白 严重影响着世界各国养羊业的发展．目前，国内外 的单克隆抗体建立特异性血清学诊断方法和肽疫苗 对OPA的诊断主要依靠临床症状检查和病理组织 的研制奠定基础． 学检查，但OPA的自然感染潜伏期为24年[61， 常规诊断方法不能及早发现本病，难于胜任对 ·国家自然科学基金和中国农业科学院哈尔滨兽医研究 OPA快速诊断的需要．最近发现，感染羊的肺脏 项目．