第十三章 程序性细胞凋亡和细胞衰老.pptVIP

第十三章 程序性细胞死亡和细胞衰老 第一节 细胞凋亡(Apoptosis) ●细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡的分子调控机理 一、动物细胞的程序性死亡 凋亡（apoptosis） 坏死（necrosis） 自噬（autophagy） （一）细胞凋亡 概念：细胞凋亡是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程，凋亡细胞将被吞噬细胞吞噬。 蝌蚪尾的消失；脊椎动物的神经系统的发育； 发育过程中手和足的形成过程等。 细胞凋亡的形态学特征 ◆凋亡的起始：细胞表面的特化结构如微绒毛消失，细胞间接触的消失，但细胞膜依然完整；线粒体大体完整，但核糖体逐渐从内质网上脱离，内质网囊腔膨胀，并逐渐与质膜融合；染色质固缩，形成新月形帽状结构等形态，沿着核膜分布 ◆凋亡小体的形成：核染色质断裂为大小不等的片段，与某 些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞质膜所包围。细胞表面产生了许多泡状或芽状突起，逐渐形成单个的凋亡小体 ◆凋亡小体逐渐为邻近的细胞吞噬并消化 细胞凋亡的生化特征 ◆细胞凋亡的主要特征是形成大小为 180～200bp特征性的DNA ladders ◆凋亡细胞组织转谷氨酰胺酶tTG （tissue Transglutaminase）积累并达 到较高水平 细胞凋亡的检测 1. 形态学，电镜，光镜； 2. DNA凝胶电泳——ladder； 3. 流式细胞计； 4. 核酸内切酶活力检测； 5. 免疫学方法； 6. Annexin V检测细胞膜外表面PS； 7. TUNEL技术。 诱导细胞凋亡的因子 ◆物理性因子，包括射线（紫外线，? 射线等）， 较温和的温度刺激（如热激，冷激）等 ◆化学及生物因子：包括活性氧基团和分子，DNA 和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿 瘤坏死因子?（TNF?），抗Fas/Apo-1/CD95抗体等 （三）细胞自噬 如消化酶来源于死亡细胞本身的溶酶体，则称为自溶（autolysis）；若来源于浸润坏死组织内白细胞溶酶体，则为异溶（heterolysis）。 细胞凋亡的分子调控机理 ●线虫(C.elegans)凋亡研究发现ced3,ced4基因促进 细胞凋亡，ced9基因阻止ced3/ced4的激活，抑制 细胞凋亡。Ced3哺乳类同源物是ICE(Interleukin- 1-converting enzyme)，即Caspase1 ●Caspase家族与凋亡 ●Bcl-2家族、线粒体与细胞凋亡 Caspase家族与凋亡 ◆Caspase家族 ·Caspase活性位点是半胱氨酸(Cysteine)， 裂解靶蛋白位点是天冬氨酸残基后的肽 键，因此称为Cysteine aspartic acic specific protease，即Caspase ◆Caspase活化 ◆胞外信号分子诱导的细胞凋亡途径 Caspase活化 Caspase自身以非活化的Procaspase存在，其激活依赖于其他的Caspase在它的天冬氨酸位点裂解活化或自身活化 胞外信号分子诱导的细胞凋亡途径 ·凋亡信号通路 当细胞接受凋亡信号分子(Fas,TNF等)后，凋亡细胞表面信号分子受体 相互聚集并与细胞内的衔接蛋白(Adaptor protein)结合，这些衔接蛋白又 募集Procaspases聚集在受体部位，Procaspase相互活化并产生级联反应，使 细胞凋亡 ·下游Caspases活化后，作用底物： 裂解核纤层蛋白，导致细胞核形成凋亡小体； 裂解DNase结合蛋白，使DNase释放，降解DNA形成DNA Ladder; 裂解参与细胞连接或附着的骨架和其他蛋白，使凋亡细胞皱缩、 脱落，便于细胞吞噬； 导致膜脂PS重排，便于吞噬细胞识别并吞噬。 Bcl-2家族、线粒体与细胞凋亡 ◆Bcl-2是一种原癌基因，是ced-9在哺乳类中的同源物，能抑制细胞凋亡；与线粒体及内质网膜相结合；Bcl-2蛋白的羧基末端有一穿膜的结构域；Bcl-2家族成员的基因中，常常含有三个保守的Bcl-2同源区，即BH1，BH2和BH3 ◆Bcl-2、线粒体与细胞凋亡 ◆哺乳动物细胞中发现的Apaf2即是CytC Bcl-2、线粒体与细胞凋亡 ◆当Caspase8活化后，它一方面作用于Procaspase3，另 一方面使Bid裂解成2个片段，其中含BH3结构域的C-端 片段被运送到线粒体，与Bcl-2/Bax的BH3结