PCR-RFLP检测载脂蛋白CⅢ基因T-455C多态性方法的建立及应用.pdfVIP

276 ofClinical Journal 临床检验杂志2007年第25卷第4期ChineseLaboratory 文章编号：10001-764X(2007)04-0276-04中图分类号：Q503 文献标识码：A ·研究生园地· C多态性方法 PCR—RFLP检测载脂蛋白CⅢ基因T-455 的建立及应用术 俞娟，王惠民，张志泉，陈连英，周锦红，于婷(南通大学附属医院检验医学中心，江苏南通226001) 法；apoCm-455C等位基因与HTG的发生相关。 关键词：载脂蛋白cm；多态性；聚合酶链反应．限制性片段长度多态性；高三酰甘油血症 肝、肾、甲状腺等疾病，女性61例，男性52例，年龄 自1983年发现apoCⅢ基因与高三酰甘油血症 (HTG)相关性以来，apoClll基因多态性一直为研究 热点，近年来主要集中于启动子区的多态性研究，主 患者。以上研究对象均系无血缘关系的汉族人群。 要因为其内存在一个功能区域一胰岛素反应元件 (IRE)(-490—449bp)，胰岛素通过与IRE结合从 m的转录，进而减少HTG的发生。T一 而抑制apoC 455C是位于IRE内的一个多态性位点，455位点的 单碱基突变可以消除apoCIn基因启动子对胰岛素 的反应性11』，从而引起HTG。 我们建立了聚合酶链反应一限制性片段长度多 111-455位点多态(100g／LSDS10ml，1 8．0riffs—HCl5ml， 态性(PCR—RFLP)方法分析apoC mmol／L、pH 0．5 8．0EDTA0．4 性，探讨了中国南通汉族人群apoCIn基因T-455C ml，加水至100ml，高 mmol／L、pH 多态性的频率、分布以及与血脂及载脂蛋白的关系， 压灭菌，4 57- m基因T-455C多态性是否与当地汉族另U为：pl 7，p2 以明确apoC TGAGTCCACGCTGCTGTCCC-3 人群HTG发病有关联，为探讨中国汉族人群HTG 7，由上海生工公司合 的发病机制及分子诊断提供依据。 成及纯化。 1材料和方法 1．3实验方法 ml 1．3．1基因组DNA抽提从1 1．1研究对象74例正常对照组人群来自本院体 EDTA—K2抗凝 mmol／L、总胆固醇外周血中提取有核细胞，用蛋白酶K和白细胞裂解 检中心，诊断标准为拉J：TG1．7 (Tc)5．17mmol／L，均排除肝、肾、甲状腺等疾病，液隔夜消化，然后用酚／氯仿／异戊醇法抽提基因组 女性37例，男性37例，年龄24～78岁，平均年龄DNA，溶于适量TE缓冲液，一20℃保存备用。 (40．49±10．5)岁；113例HTG患者组诊断标准 o：TG2．2