文蛤多肽的体外抗癌活性研究 Antitumor activity of peptide from Meretrix meretrix in vitro.pdfVIP

第28卷第4期 台 湾 海 峡 V01．28．No．4 OFOCEANOGRAPHYINTAIWANSTRAIT 2009年11月 JOURNAL Nov．，2009 文蛤多肽的体外抗癌活性研究 范成成1，张 剑1，康劲翮1，邱乒乒1，韩鹏1，李文岗2，陈清西1 (1．厦门大学生命科学学院、细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室，福建厦门361005； 2．福建医科大学附属厦门第一医院，福建厦门361004) 摘要：采用硫酸铵沉淀、有机溶剂分离、SephadexG-25分子筛层析等实验方法，从文蛤肉中提取了一 种低分子量的多肽，命名为Met2．本文以溴化二苯偶氮盐(Mar)法检测Mer2对体外培养的癌细胞 Mer2含量的增高和处理时间的延长而增强，证明Mer2具有广谱的抗癌活性．其中Mer2对人肝癌 HepG，细胞株抑制作用最为显著，光学显微镜观察经Mer2细胞培养液处理后的细胞形态发生明显 的改变，流式细胞仪实验的结果表明处理后的细胞周期发生明显的改变，并在Go／G1期前出现凋 亡峰． 关键词：海洋生物学；细胞；文蛤多肽；抗癌；MTr比色法；凋亡 DOI：10．3969／J．ISSN．1000·8160．2009．04．005 中图分类号：Q24．7；Q28 文献标识码：A 癌症又称恶性肿瘤，是严重危害人类健康的一类疾病，现有的抗肿瘤药物对多数肿瘤的治疗具有一定疗 效，但都不可避免地伴随着效率低、选择性差、毒副作用大等诸多弊端．因此，从自然界中筛选出高效、低毒副 作用的抗癌天然活性成分，已成为抗癌新药物研究的热点．由于海洋物种资源丰富，各国学者已从多种海洋 生物中分离和鉴定出了多种具有抗肿瘤活性的天然物质…．从海洋生物及其代谢产物中筛选和提取具有抗 癌活性的天然物质成为抗肿瘤新药物的重要来源．本实验选取的海洋生物文蛤(Meretrixmeretrix)是一种营 养丰富的海洋软体动物．它具有清热利湿、化痰、散结的功效，对肿瘤细胞有明显的抑制作用，还具有降血糖、 降血脂、抗衰老、抗突变和抗艾滋等多种生理功能忙qJ．其药用价值已受到越来越广泛地关注．文蛤肽是我们 实验室提取出来的一种低分子量的多肽，实验已经证明其对肝癌和胃癌细胞有明显的抑制作用，并对与癌细 胞生长发育有关的SOD酶、碱性磷酸酶有激活作用，对酪氨酸酶和N．乙酰．B—D一氨基葡萄糖苷酶有明显的抑 制作用[9叫01．本文在此基础上对文蛤多肽的抗癌机理进行了更深一步的研究，为阐明文蛤多肽抗癌作用机 理，以及对文蛤药用价值的进一步开发提供理论依据． 1材料与方法 1．1 材料 文蛤(Meretrix DMEM培养基为Gibco公司产品，小牛血清为Hyclone公司产品． 1．2文蛤多肽的分离提取 文蛤多肽的分离纯化方法参照文献[9]，经过硫酸铵沉淀、有机溶剂抽提、SephadexG-25分离等步骤，从 收稿日期：2008一11．14 (XDKJC 作者简介：范成成(1985一)，女，硕士研究生． 通讯作者：陈清西，教授，博导，E-mail：ehenqx@Ⅻm．edu．∞；李文岗，副教授，硕导，E—mail：1wgll861@163．e．om 万方数据 4期 范成成等：文蛤多肽的体外抗癌活性研究 ·473· 文蛤肉中分离提取文蛤多肽命名为Met2． 1．3细胞培养 条件下培养过夜后用Mer2细胞培养液处理． 1．4文蛤多肽Mer2抑癌作用的时效和量效测定 鲜细胞培养液和5ms／cm3 充分溶解紫色结晶后，用M3550型酶标仪测量490nm的光密度值．按下式计算抑制率： 抑制率(％)=墅塑塑{翕篡f麦铲×100 1．5 Mer2的抗癌瘤谱筛选 制作用．本实验采用5个含量(80、40、20、10、5tLg／cm3)，培养时间均为48h，实验重复3次． 1．6肝癌细胞HepG2形态观察 液处理48h，在光学显微镜下观察其形态并拍照． 1．7细胞周期检测 48、72h后用0．25％(