沙利度胺对实验性矽肺血管生成的干预的研究.pdfVIP

．526． 第十七次全国职业病学术交流会论文集 湖北宜昌 还不多，但是提供了阻断始动因素治疗肺纤维化的一个崭新前景，如何调节肺损伤后早期的血管生成，使 之适度增生修复，既能促使组织损伤早日修复，又不至于过度新生引起修复失控导致纤维化发生，值得我 ， 们深入探讨。 ，，剩 ／磊胺对实验性矽肺血管生成的干预研究 辛建保。彭 清2 1韭、∑ ，属，，Z怖呕院 武汉4300222上海瑞金医院集团闵行医院上海201100 ’矽肺是长期吸入大量含有游离二氧化硅粉尘引起的疾病，主要在肺内引起广泛结节性纤维化。治疗矽 肺，医学上做了很多努力，但长久以来人们都局限于矽肺发生的炎性细胞和炎性因予的研究．很大程度上 忽视了矽肺发生早期血管生成的病理变化。任何组织损伤后的修复都离不开血管生成，血管生成是炎症发 生、组织修复的关键。血管生成的异常失控必定会引起炎症反应和组织修复的失控，因此新生血管在矽肺 疫调节剂，可以明显抑制血管生成和降低胶原合成，已证实对肝纤维化及肝硬化具有一定疗效¨11。本实验 通过用气管内给予二氧化硅建立矽肺模型，采用沙利度胺对实验性矽肺进行干预，观察实验性矽肺形成过 程中肺组织局部血管生成的动态变化，初步探讨沙利度胺对血管生成的影响及对矽肺肺纤维化的干预作 用。 1材料 1．1实验动物健康SD(Sprague 学院实验动物中心提供。 1．2主要试剂二氧化硅粉剂购于SIGMA公司，沙利度胺片购于常州制药厂有限公司，羟脯氨酸试剂盒购 于南京建成生物工程研究所，兔抗鼠八因-了相关抗原(VIII．R Ag)多克隆抗体为北京中杉金桥生物技术有 限公司产品，小鼠抗大鼠p-Akt(Ser473)单克隆抗体为cellsignalingtechnology公司产品。 2方法 环间隙向心端刺入，回抽空气无阻力后，将药物注入气管，迅速将动物直立、旋转，使药物在肺内均匀分 布。对照组同等方法注入同样体积的生理盐水。依层次缝合颈部各层。自第二天起，沙利度胺组大鼠每天 按100mg·kg’1将沙利度胺药粉拌入部分基础饲料中监督食尽，然后饲基础饲料；对照组常规基础饲料喂 养。 取出肺脏，结扎右侧主支气管，向气管内灌注4％多聚甲醛，直至左肺膨胀边缘变锐，胸膜展平，结扎左 侧主支气管，立即置于4％多聚甲醛固定24h，取左侧肺常规石蜡包埋、切片，行HE染色、免疫组化染色； 右侧肺取少量置于EP管中，行肺组织羟脯氨酸(HYP)含量测定，其余肺组织置于-70C冰箱保存。t 2．3肺组织羟脯氨酸(}ⅣP)含量测定(样本碱水解法)’ 羟脯氨酸的含量反映了肺组织胶原的含量，用以判断肺纤维化的程度。羟脯氨酸在氧化剂的作用下所 产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色，本法利用羟脯氨酸氧化后的这种特性，按照羟脯氨酸 试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明进行分析，计算肺组织羟脯氨酸含量。 第十七次全国职业病学术交流会论文集 湖北宜吕 ．527． 2．4脏染色取石蜡切片，60℃烤2h，二甲苯脱蜡，洒精梯度脱水后，常规HE染色。 2．5免疫组化染色肺组织标本常规石蜡切片，60(2烤2h，二甲苯脱蜡至水进行免疫组化染色fPBS洗三 次，每次5mira3％过氧化氢甲醇溶液室温孵育20 rain，、以灭活内源性过氧化物酶；蒸馏水洗3次，PBS 色剂显色：蒸馏水洗，～苏木素复染，”脱水：透明、1封片：’ 染色结果分析‘阳性表达位于细胞质，。为棕黄色改变：细胞核为蓝色。每只鼠取5张切片，，每张切片 的平均吸光度值观察纤维化各个阶段各组肺组织中p-Akt表达的变化。 2．6血管计数． 管密度最高区域，再在200倍光镜下记录被抗因子Ⅶ相关抗原(vWf)抗体染成棕黄色的血管数，以4个 200倍光镜下测量的微血管平均数表示，然后200倍视野血管数／0．739，把血管密度换算成个／mm2。 3统计学分析～ 所有数据资料均以均数±标准差弋X±s)表示。所有数据结果采用SPSSl2．0统计软件包进行分析， 统计分析采用方差分析及q检验，尺0．05为差异有统计学意义。… 4结果 沙利度胺组羟脯氨酸含