水稻吸铵基因OsAMT1.2和OsAMT3.3在不同生育期中的表达量差异及其在酵母细胞中吸铵功能初析 Expression of OsAMT1.2 and OsAMT3.3 in Rice Root with Relation to Different Growth Stages and Functional Characterization in Yeast Mutant.pdfVIP

水稻吸铵基因删M刀．2和删．?哪．3在不同生育期中的 表达量差异及其在酵母细胞中吸铵功能初析① 曹 玉“2， 李素梅1， 施卫明¨， 苏彦华1 (1土壤与农业可持续发展国家重点实验室(中国科学院南京土壤研究所)，南京2lO008； 100049) 2中国科学院研究生院，北京 摘要： 本文利用定量PCR技术分析了n叫M丌．2和D鲥M乃．3在水稻根中的表达水平，并应用铵吸收功能缺陷型酵母 在分蘖期的表达水平较苗期高；苗期D．，爿胛，．2与D叫M乃．，的转录水平差异不显著，但分蘖期囟渊^，丌．2的表达水平快速升高， 较苗期提高了5倍，而0叫M乃．3的表达量只提高了一倍，导致两者的表达水平存在显著差异。缺N处理2天两基因均有被诱 导增强表达的趋势，其中苗期的增加幅度明显高于分蘖期。当外源供给lmmol，LNH4+，oSAMTl．2在铵吸收功能缺陷型酵母突 变体上仅表现部分功能．而os肘旧13．3则不能实现吸铵功能互补。以爿州舸，．，为对照，分析伽肘．2在酵母中的表达水平， 结果表明异源系统中0叫j唧．2的相对表达量仅有爿“埘，．J的50％．本文的结果说明，外源基因在酵母异源系统中的异源表达， 除了与基因产物本身的功能有关，还取决于宿主酵母细胞对其表达水平的调控，因而表现出受内源机制调控的特征。 关键词： 0sAh仃；Rcal-timeRT-PCR；酵母异源表达系统 中图分类号：S5ll；S143．1 氮(N)是作物从土壤中吸收量最多的元素，对作 物的生命活动和产量形成具有重要的意义。现阶段水 测的基因有相对高的表达水平和该基因特异性的探 稻对N肥的利用效率仅30％～35％【I～，一方面造成肥 针，而AMT各基因的表达水平相对比较低，尤其是 料的浪费，另一方面对生态环境造成极大威胁【3呻】。 AMT2家族的基因，因此很难精确定量和直观地比较 NH。+．N是主要的N肥形态，植物通过铵转运蛋白各4胛基因的表达水平。另外，虽然对伽肘家族 (锄monium transporter，AMT)从土壤溶液中吸收的3个基因的研究较为深入，但是对0叫M乃家族基 NH4+-N。水稻是典型的喜铵作物，其基因组序列中有因的报道很少，D叫胛基因的表达水平在不同生育期 10个仇爿^仃i基斟101，但是对其研究并不多，大部分是否有不同的变化也还有待明确。 局限于伽肘丌家族的3个基因上【廿11】，结论还存在 NiIlnem锄等【uJ以酵母铵缺失突变体为材料利用 一定的争议。Kum盯等…】研究了水稻G州M丌家族的 功能互补原理首先证明了拟南芥彳纠肘丌．，是编码高 3个基因的表达规律，认为0叫M丌．，受低N诱导， 亲和铵转运蛋白的基因。对拟南芥基因组序列的分析 高N抑制；伽M丌．2受N调节的规律同0叫M丌．，， 发现了另外4个同源性较高的基因(彳纠M”．2．，．5)。 但变化幅度只有O叫M”．J的50％；而a叫肘．3对N之后，在拟南芥、番茄【14。1习和水稻【lo，16哪!中相继分离 的效应没有前两者明显，主要受光照诱导表达。此 出AMTl家族的其他基因，如拟南芥中的爿纠^仃，．2、 外，Suenaga等【12】对伽肘他家族的D消M龙．，和4纠肘”．型18】和爿纠肘丌．，19】。这些发现表明，在植物中 洲M乃．，也进行了初步的研究，发现伽觚2．，主要 AMTl基因家族由至少3～5个成员组成。除三叫M”．， 在根中表达，且受N的影响不是很明显；叶中的 作为单向转运的吸铵基因在爪蛙卵母细胞异源表达系 伽觚2．，受缺N和加N诱导表达；缺N也诱导统实现明确的功能验证以外，其他绝大部分AMTl家 0州肘乃．J的表达。以上均是NortIlem杂交或半定量 族蛋白的功能都通过其在酵母铵吸收缺失突变体的功 ①基金项目：中国科学院知识创新工程重要方向项目和国家973项目(2007CBl09303)资助． ’通讯作者(wmshi@is哪．∞．饥) 作者简