【优质】《分子生物学常用技术在中医药研究中的应用》实验课08Northernblot(23P).pptVIP

* * 实验 19 Northern blot 目 的 1．定量分析某一特定基因mRNA的转录与否，以及转录的水平。 2．比较两个或两个以上不同组织某一已知基因转录的差异。 3．比较两个或两个以上不同组织某一未知基因转录的差异。 由于此方法具有稳定、可靠、假阳性少等特点，多年来一直深受广大研究者的喜爱。其结果可以同时反映某一特定基因RNA分子量的大小及其数量。在中医药实验中通常以此来判别某一中医药方法对某一已知基因转录的调控作用。例如我们的GnRH、N-ras、白蛋白等研究。 通常观察某一分子的变化有两个层次，蛋白水平的和核酸水平的。两者的含量变化均与其生成、代谢有关，而两者的作用发挥还关系到其质量、修饰、环境条件等因素，这些变化采用观察蛋白与核酸的量是不能回答的，所以对Northern blot的结果要有客观的分析。 类似的实验主要为RT-PCR。 原 理 采用变性凝胶电泳，使RNA分子由小到大排列于凝胶之中。应用虹吸原理，将RNA转移至硝酸纤维素膜，烘干，使RNA牢固地结合在硝酸纤维素膜上。与放射性标记的探针杂交，杂交后，洗去未被杂交上的探针和游离的同位素，将硝酸纤维素膜放射自显影，使胶片上出现对应于相应分子量mRNA的条带。最后，对条带进行光密度扫描，并统计分析。 实验准备 （参考教材） 实验步骤 1．