兔白细胞介素-10基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备.pdfVIP

畜牧兽医学报2013，44(5)：788—795 AetaVeterinariaetZootechnicaSinica 兔白细胞介素一10基因的克隆、原核表达及其 多克隆抗体的制备 娟1， 挺 2，吴信生1’2’ 万小颖1’2，秦立志1’2，施丽2，王文洲1’2，李 1’2，李碧春1’ (1．扬州大学动物科学与技术学院，扬州225009；2．江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州225009) 摘要：白细胞介素一IO(IL—lO)是一种多功能的细胞因子，参与免疫调节和抗炎反应。本研究旨在克隆并表达IL一 亚克隆入原核表达载体pET-32a并转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白，融合蛋白经纯化后免疫 blot检测抗体的效价和特异性。结果表明：克隆得到了 豚鼠制备多克隆抗体，最后分别用间接ELISA和Western 兔JL一10基因，大小为537 000， 载体pET—IL-10构建成功；SDS电泳结果显示融合蛋白成功表达；制备的多克隆抗体效价高达1：56 且具有很高的特异性。成功实现了兔JL一10基因的原核表达，并制备了豚鼠抗兔IL一10多克隆抗体，为深入研究兔 JL一10基因的功能奠定了基础。 关键词：白细胞介素一10基因；克隆；表达；抗体制备 中图分类号：Q78；$829．1 文献标志码：A 文章编号：0366—6964(2013)05—0788—08 and of Cloning，ProkaryoticExpressionPolyclonaiAntibodyPreparation Rabbit儿一10Gene WAN Li—zhil一，SHI Wen-zhoul一，LITin91～， Xiao-yin91一，QIN Li-juanl一，WANG UBi—chunl一。WU Xin-shen91’2+ AnimalScienceand 225009，China； (1．Collegeof Technology，YangzhouUniversity，Yangzhou and Animal Molecular Laboratoryof GeneticsBreedingDesign，Yangzhou 2．JiangsuKey 225009，China) Abstract：Interleukin-10(IL一10)hasbeen identifiedasamultifunctionalbecause recently cytokine of and aimofthis itscloselinkwithimmune study regulationanti—inflammatoryresponses．The wasto rabbitIL-IO inorderto the