共价固定亲和素的磁性纳米粒子用于快速测定蛋白A含量.pdfVIP

V01．33 高等学校化学学报 No．7 CHEMICALOFCHINESEUNIVERSmES 1426—143l 2012年7月 JOURNAL 共价固定亲和素的磁性纳米粒子 用于快速测定蛋白A含量 孙术国1”，马美湖1，覃芳1，徐娅茹1，余文珍1，罗章1 (1．华中农业大学食品科学技术学院国家蛋品加工技术研发分中心，武汉430070； 2．吉首大学化学化工学院，吉fi-416000) 摘要采用溶剂热法制备了Fe，04磁性纳米粒子(MNPs)，以戊二醛为交联剂，将亲和素共价固定于MNPs 表面．用透射电子显微镜(TEM)、x射线衍射(XRD)、紫外一可见吸收光谱(uV—Vis)、傅里叶变换红外光谱 (盯IR)和荧光光谱等手段对蛋白固定过程进行了监控和表征．采用荧光光谱法评价了固定亲和素的磁性纳 后MNPs的粒度分布均匀，粒径大小分别约为30和50ntn．XRD分析结果表明，MNPs与Fe，04的特征衍射 峰完全一致，晶体纯度良好．uV—Vis，唧R和荧光光谱结果表明，亲和素已固定在MNPs表面．Avi—MNPs活 性评价结果表明．其结合生物素的活力为4．706U／ragAvi—MNPs，低于游离的亲和素活力(14．IU／nag D—biotin)．该方法用于检测蛋白A含量比传统酶联免疫法省时、省力，且对检测仪器要求低． 关键词磁性纳米粒子；亲和素；共价固定；活性评价 中图分类号0657 文献标识码A DOI：10．3969／j．issn．025l-0790．2012．07．01l 磁性纳米粒子由于具有良好的磁导向性和生物相容性，已被广泛用于药物靶向运输【“、细菌分 离旧J、免疫分析旧1和酶的固定化。4’51等领域．免疫分析是现代生物分析技术中一种重要的分析方法， 它利用免疫磁珠对抗体或抗原进行定量分析，但磁珠表面与抗体或抗原的非特异吸附影响了结果的准 确性．在纳米粒子表面与抗体或抗原之间修饰一层不会与目标蛋白发生相互作用的生物大分子，可降 低非异性吸附，提高分析的准确性．其中亲和素作为传统酶联免疫吸附法测定抗体或抗原的工具蛋 白，在降低非特异性吸附、提高检测的准确性方面效果良好．亲和素是禽蛋蛋清中的一类四聚体糖蛋 70℃高温下仍能保持活性071，因而亲和素一生物素系统备受关注．目前，亲和素已经广泛用于生化测 定。8t91和生物传感器¨则领域，包括分子印迹。1“、酶标记免疫吸附测定¨2’”1和酶联免疫斑点法【”o等， 这些应用成功与否依赖于固定在支持物上的亲和素的活性大小和检测设备的性能．传统的支持物为酶 胶板，亲和素固定于酶胶板的过程耗时费力，活性损失较大，且需与酶标仪联用才能完成测定，在使 用上受到限制．然而，将亲和素固定在Fe，O。磁性纳米粒子(MNPs)上，可最大化保持其活力，且只需 紫外一可见分光光度计即可完成对抗体或抗原的测定．本文用溶剂热法制备MNPs，用戊二醛作交联剂， 将亲和素固定于MNPs表面，采用光谱方法监控整个固定化过程并对产物进行表征，同时对固定亲和 素的Fe，O。磁性纳米粒子(Avi—MNPs)进行了活性评价，并将其应用于测定蛋白A的含量． 1 实验部分 1．1试剂与仪器 收稿日期：2011-08-22． 基金项目：国家现代农业产业技术体系建设专项资金(批准号：CARS-41-K23)资助． 万方数据 孙术国等：共价固定亲和素的磁性纳米粒子用于快速测定蛋白A含量 清白蛋白(BSA)均购于普博欣生物科技有限责任公司．缓冲液A(100mmol／L氯化钠+50mmoL／L磷酸 二氢钠+l moL／L磷酸钠盐， mmoVL乙二胺四乙酸，用氢氧化钠调节溶液pH=7．5)；缓冲液B(0．2 5700 智能傅里叶红外光谱仪(美国Thermo 1．2实验方法 1．2．1MNPs的制备、功能化和共价固定亲和素