乙肝病毒核酸定量检测临床价值.docVIP

乙肝病毒核酸定量测定的临床价值 贾中华1 谢爱国2 陈素花3 1,2江西省高安市人民医院检验科 3江西省高安市灰埠中心卫生院 [摘要]目的:研究乙型肝炎患者HBV-DNA定量检测与血清学免疫标志物及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的关系.方法:用荧光定量PCR法检测326份乙肝表面抗原阳性标本中的HBV-DNA,同时检测血清免疫标志物和ALT.结果:326例乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例,阳性率为65.34%(213/326),ALT异常率为37.42%(122/326). 113例乙肝表面抗原阳性、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例,占59.29%(67/113), HBsAg、抗-HBc阳性31例,占24.73%(31/113),其它15例,占13.27%(15/113).ALT异常率6.19%.结论: HBV-DNA检测低于检测线下限并不代表体内HBV-DNA已被完全清除,结合其它血清学免疫指标和生化学指标更能客观反映体内HBV病毒状态,正确判断预后和治疗. [关键词]乙型肝炎;乙肝病毒核酸(HBV-DNA);荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR);丙氨酸氨基转移酶(ALT) 1 材料与方法 1.1 对象 2006年8月本院门诊和住院部乙肝病毒表面抗原携带者326例,年龄3-80岁,平均25.80岁.男性231例,女性95例. 1.2方法 1.2.1 HBV-DNA检测 采用杭州博日公司的line-gene检测分析系统进行实时荧光定量PCR检测.试剂盒采用广州中山医科大学达安基因股份有限公司的乙型肝炎病毒(HBV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒.检测步骤按试剂盒使用说明书. 分别设阴性质控品,阳性质控品,空白对照以及阳性定量质控标准品梯度.检测结果＞103拷贝/ml判断为阳性,否则为低于检测线下限. 1.2.2 HBV血清学免疫标志物检测 用酶联免疫法(ELISA)检测HBsAg,抗-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc共5个项目.采用华美生物工程公司的乙型肝炎诊断试剂盒,测定步骤参照说明书. 分别设阴性,阳性,空白对照,用酶标仪读数,样品OD值≥阴性对照平均OD值×2.1判断为阳性,否则为阴性. 1.2.3 ALT检测 采用生化自动分析仪检测,正常值＜40U/L. 1.2.4 资料统计 采用excel 2000 软件进行处理. 2 结果 2.1 326例乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例,阳性率为65.34%(213/326),ALT异常率为37.42%(122/326). 113例乙肝表面抗原阳、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例,占59.29%(67/113), HBsAg、抗-HBc阳性31例,占24.73%(31/113),其它15例,占13.27%(15/113).ALT异常率6.19%. 2.2 HBV-DNA定量与血清学免疫标志物检测结果比较见表1 2.3 HBV-DNA定量与ALT异常率比较见表2 表1 326份标本HBV-DNA定量与血清学免疫标志物检测结果 标本数 HBV-DNA拷贝/ml 大三阳例数 小三阳例数 HBsAg、抗-HBc阳性例数 其它 20 108 17 2 1 0 66 107 57 4 5 0 30 106 6 11 13 0 20 105 2 10 7 1 16 104 1 12 2 1 61 103 2 37 19 3 113 ＜103 0 67 31 15 表2 326份标本HBV-DNA定量与ALT异常率 标本数 HBV-DNA拷贝/ml ALT异常例数(U/L) % 20 108 14 70.00 66 107 54 81.82 30 106 26 86.67 20 105 11 55.00 16 104 5 31.25 61 103 5 8.20 113 ＜103 7 6.19 3讨论 实时荧光定量PCR是目前临床检测血清HBV-DNA常用的分子生物学方法.本系统充分利用了Taqman酶独特的生物学活性和荧光激活、淬灭性质,合成了分别携有荧光集团和淬灭集团近距引物、探针,在循环进行中即可检测荧光强度并用软件与内参比进行定量分析.由于无需开盖检测PCR产物,避免了以往传统PCR易产生假阳性污染物的缺点.检测重复性好,而且实时荧光定量PCR还解决了抗病毒药物疗效观察的一大难题. 326份乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例,阳性率为65.34%(213/326),ALT异常率为37.42%(122/326).其中,大