慢病毒血管内皮生长因子165载体的构建和其在脂肪组织来源的干细胞中过表达的研究.pdfVIP

生堡塞堕处整苤壹垫!!生!旦筮!!鲞箜鱼翅堡垒也』垦翌!坚强：』!竺垫!!：!尘：垫：盟!：鱼 ·893· ·泌尿夕!-乖-ai-· 慢病毒一血管内皮生长因子，65载体的构建 及其在脂肪组织来源的干细胞中过表达的 研究 孙祥宙 刘贵华黄燕平 高勇 张亚东 邓春华 【摘要】 目的构建慢病毒．血管内皮生长因子。。(VEGF，舒)载体并转染脂肪组织来源干细胞 (ADSCs)以得到用于基因治疗的种子细胞。方法通过聚合酶链反应(PCR)方法将EHSl001． 6895048 5313912克隆突变成VEGFl口(NM一001025368)转录本后采用三质粒系统(pGC．FU、 pHelpl．0和pHelp2．0)进行包装慢病毒。通过定时定量PCR测定滴度后使用慢病毒一VEGFl65转染 ADSCs。免疫荧光、Western bp)、DNA测序、 blot鉴定VEGF，65在ADSCs中的表达。结果PCR(535 Western blot(49×103)检测证明成功构建的载体为VEGF，酪与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体。 实时定量PCR确定病毒滴度达到2×108TU／Inl。慢病毒一VEGF。酗载体转染ADSCs后经免疫荧光验 证约95％ADSCs可表达VEGF。，同时Westernblot也证明基因稳定表达。结论通过获得稳定表 达VEGF。的ADSCs，为血管性疾病特别是糖尿病性勃起障碍的治疗奠定了基础。 【关键词】 脂肪组织来源干细胞；VEGFl65；慢病毒；过表达 Constructionof vectorand in tisue-derivedstemcells VEGFl“lentivirMover-expressionadipose Chun-hua．De— ．s洲Xiang-zhou，口UGui—hua，HUANG Ya—dDng，DENG Yan-ping，GAO％增，ZHANG Yat—sen First Sun partmentofUrology，theAffiti疵dHospitalof Unitersity，Guangzlwu510080，China a眦hor：DENGChun．hua．Email：dch03i3@163．corn Corresponding studiesfoundthatstemcellscallactas vector．But therapeutic 【Abst聃ct】ObjectiveMany gene thereigfewrelated focusonthe tissue—derivedstemcells(ADSCs)．Thereforeweintendto report Adipose and constructalentiviralvaseularendothelial vectorinfectthe growthfactorl65(VEGFl65)overexpression ADSCsto seedcells．Methods Was producetherapeutic VEGFl65transcript(NM_001025368)fragment fromtheEHSl00l一68950485313912clone