慢病毒——基因转移潜在新载体.pdfVIP

慢病毒——基因转移的潜在新载体 用于基因治疗的载体系统可分为病毒性载体和非病毒性载体两类。目前常用的病毒 载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等, 但是这些载体均存在不足之处,严重影响了基因治疗的有效性及安全性。在基因治疗中广泛 应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞,而腺病毒载体虽然能 转导非分裂期细胞,但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容易引起免疫反 应。慢病毒载体不但可以感染非分裂期细胞,还具有容纳外源性目的基因片段大、免疫反应 小等优点,在基因治疗中具有广泛的应用前景。现以 HIV-1 为例,就慢病毒载体的生物学特征、 慢病毒载体的构建、在基因治疗中的应用以及生物安全性等 方面作一综述。 一、 慢病毒载体的生物学特征 慢病毒包括灵长类慢病毒,如人 类免疫缺陷病毒(HIV) 和猴免疫缺陷病毒(SIV) ,以及非 灵长类慢病毒如猫免疫缺陷病毒( FIV) 、马传染性贫血病毒(EIAV) 、牛免疫缺陷病毒(BIV) 和 维斯纳-梅迪病毒(VMV) 等。目 前,HIV-1、HIV-2、SIV、FIV 及 EIAV 被广泛研究用作基因治 疗的载体,而其中又以 HIV-1 最为热门。 1.1 HIV-1 病毒形态与结构 成熟的 HIV-1 病毒直径 100 ～120 nm、呈 20 面体对称结构、球形,电镜下可见一致密圆 锥状核心,内有病毒RNA 分子和酶,后者包括逆转录酶、整合酶(integrase) 和蛋白酶(protease)。 HIV-1 的最外层为脂蛋白包膜, 膜上有表面蛋白 (gp120) 和相嵌蛋白(gp41) 两种糖蛋 白,gp120 为刺突,gp41 为跨膜蛋白。包膜内面为 P17 构成的基质蛋白(matrix) ,包膜内为衣壳 蛋白(P24)包裹的 RNA。 1.2 HIV-1 病毒基因组结构及其功能特征 HIV-1 的基因组由两条相同的正股 RNA 链在 5′端通过部分碱基互补配对而成二聚体。 病毒基因组全长约 9200bp ,含有 gag、 pol 、env 3 个结构基因以及 tat 、rev、nef 、vif 、 vpr 、vpu 6 个调节基因。在病毒基因 组的 5′端和 3′端各有相同的一段核苷酸序列,称为长 末端重复序列(long terminal repeat ,LTR) 。gag 基因编码 p55 的蛋白前体,经蛋白酶裂解而形 成病毒的核衣壳蛋白(p7) 、内膜蛋白 (p17) 和衣壳蛋白(p24) 。pol 基因编码病毒复制所需 的酶类,env 编码 gp120 和 gp41 两种包膜 糖蛋白,决定病毒感染宿主的靶向性。tat 基因编 码的 gp14 是一种反式激活的转录因子,与 LTR 结合后能促进病毒所有基因的转录。rev 基因 编码的产物 gp19 能促进未经拼接的大 mRNA 分子从细胞核向胞浆转运,并相对减少拼接后 小 mRNA 分子的数量。nef 基因编码负调节蛋白,对病毒的 结构蛋白和调节蛋白的表达均有 下调作用。vif 编码产物与病毒体的感染性有关,vpu 产物与病毒的装配、成熟和释放有关,而 vpr 编码产物的功能尚不清楚。 1.3 HIV-1 生活史 HIV-1 病毒通过 gp120 与宿主细胞的 CD4 分子和趋化因子受体结合,然后将病毒的基 因(RNA) 、蛋白及酶等释放到宿主细胞内;随后,逆转录酶将病毒 RNA 转录成 DNA ,病毒 DNA 在整合酶的作用下插入宿主细胞核的基因组中,此时的病毒 DNA 也称为原病毒;紧接着,原病 毒转录成 mRNA ,mRNA 从细胞核进入细胞质,并利用宿主细胞的原料合成病毒的各种成分 (蛋白质) ,新合成的各种蛋白、酶及 RNA 等聚集在宿主细胞的膜下, 病毒的包膜蛋白 (gp120 ,gp41) 插入宿主细胞的细胞膜并形成一种未成熟的病毒(此时病毒无传染性) ;最后蛋 白酶将病毒核心中的许多过长的蛋白及酶切短,便形成成熟的病毒。病毒利用宿主细胞的细 胞膜将自己包被起来,离开该细胞去寻找新的宿主。 1.4 慢病毒载体转导非分裂期细胞的分子机制 慢