大熊猫生殖能力的实验设计方案.pdfVIP

竞赛设计及技术路线 1 研究目的和意义 世人皆知，大熊猫繁殖力极低。究竟低到什么程度，冯文和、张安居在 《大熊猫的生殖 生理及人工繁育》一书中提 ，大熊猫初生幼仔体重约为成年体重的千分之一，与其它高等 哺乳类相比,发育很不完善，免疫器官极不健全，加上育幼行为高度特化,母兽喂养一仔也难 正常发育，致使存活率极低，1963年北京动物园首次繁育大熊猫成功之后，人工饲养下幼 仔存活率逐年提高,世界范围内1963~1979年为21.62%、1980~1989年为36.51%、1990~1999 年为60.19%，其中成都大熊猫繁育研究基地近10年中幼仔存活率为65%。 在人工受精方面，据统计成年雄性熊猫有 20% 左右采不到精液或者采到精液而无精 虫，就是能采到精液，其量也少。每次仅有0.1-3毫升，而且精子的耐冻能力差，远远不如 猪、牛等其他家畜。大熊猫的精子，形形色色，有大头、小头、光头、双头、双尾、卷尾等 等，各种各样的形状，畸形率远远超过其他动物。冯文和认为，这是大熊猫自然交配和人工 授精受孕率极低的重要原因。 大熊猫原为大型的食肉动物, 但随着环境的改变, 经过数千年的演化与适应, 逐渐转化 为以亚高山竹类为主食的植食性动物。竹叶黄酮在竹类中含量极高，竹叶、竹皮等部位均含 有丰富的黄酮类化合物，竹提取物中总黄酮含量平均在2% 左右。国内外学者在大熊猫生 殖方面做了很多研究也取得了显著的进展，主要从生理、形态、行为方面探究大熊猫生殖能 力低下的原因，但在食物方面还没有很多研究。故本研究以模式动物ICR小鼠作为研究对 象，重点从生理、生化等方面测定相关指标研究竹叶黄酮对大熊猫生殖能力的影响。 2 研究内容 以模式动物——ICR小鼠作为研究对象，通过测定小鼠相关生理、生化指标研究竹叶黄 酮对大熊猫生殖能力的影响。 1）灌胃后小鼠雄性生殖细胞及雄性与雌性其他生理指标 对照组及不同竹叶黄酮浓度灌胃的雌、雄小鼠脏器比的测定 对照组及不同竹叶黄酮浓度灌胃的雄性小鼠精子活力的测定 对照组及不同竹叶黄酮浓度灌胃的雄性小鼠精子数的测定 对照组及不同竹叶黄酮浓度灌胃的雄性小鼠精子畸形率的测定 对照组及不同竹叶黄酮浓度灌胃的雌、雄小鼠嗜多染红细胞微核率的测定 2）灌胃后小鼠的生化指标 对照组及不同竹叶黄酮浓度灌胃的雌、雄小鼠血红蛋白浓度的测定 对照组及不同竹叶黄酮浓度灌胃的雌、雄小鼠CAT （过氧化氢酶）含量的测定 3实验方案 3.1 以竹叶黄酮溶液灌胃小鼠的实验 取ICR小鼠72只（雌雄各半），分成三组为对照组及不同竹叶黄酮浓度组。雌性灌胃 14d开始交配，继续灌胃至F1断乳结束。雄性灌胃28d开始交配，继续灌胃至交配结束。 1雌：1雄合笼饲养，每天检查雌鼠的阴道，以发现阴栓当天为妊娠0d。将妊娠的雌鼠分开 饲养、自然分娩、至F1断乳。实验期间每周要测量小鼠的体重一次。雄鼠交配结束，处死、 实验。 3.2 取材、样品的分析与测定 3.2.1 血红蛋白含量的测定 取小鼠一只，测体重（精确到小数点后面两位）；摘除眼球，用移液枪取血10ul （平行 两组），测定血红蛋白含量； 工作试剂：用蒸馏水或去离子水将试剂1和试剂2分别精确稀释25倍，即将 1份试剂 1加24份蒸馏水或去离子水混匀，将 1份试剂2加24份蒸馏水或去离子水混匀，再将经稀 释后的试剂 1和经稀释过的试剂2等量混匀，使成为工作试剂。工作试剂置于棕色玻璃瓶内 于2℃—8℃保存，可至少稳定一个月。工作试剂空白吸光度应低于0.100（540nm，水空白）， 否则应停止使用。 ①测定参数 测试方法 终点法 比色杯光径 1cm 测试波长 540nm 试剂样本比 250:1 反应温度 室温 反应时间 5min ②在测定前取适量的工作试剂，在室温下平衡 10min后使用。 ③具体操作见下表： 管号 空白管 标准管 测定管 蒸馏水或生理盐水（uL） 10 0 0 标准液（uL） 0 10 0 样本（uL） 0 0 10 工作试剂（uL） 2.50 2.50 2