HPLC法测定三七根提取液三七素含量.doc

HPLC法测定三七根提取液三七素含量 摘要：目的 测定三七总根提取液中三七素的含量，方法 采用HPLC法，乙腈-水为流动相测定含量。 结果 三七素在4-120μg/mL之间，与峰面积呈良好的线性关系( r = 0.9997) ，平均回收率为98. 51 % ，RSD为0. 61 % ( n = 6)。结论 本法简便、准确、重现性好,可以作为三七素的含量测定方法。 关键词：三七；三七素；高效液相色谱；含量测定 Abstract: Objective：Determination of dencichine extracted from notoginseng root by HPLC.. Method　The HPLC system consisted acetonitrile- water as mobile phase with detection wavelength 213nm. Results　The linear correlation was good in the range of 4-120μg/mL of dencichine,correlation coefficient is 0.9997. the average recovery was 98.51% (n= 6) and the RSD was 0.61%.Conclusion　The method is simple,accurate and can be used for determination of dencichine. Key words: notoginseng; dencichine; HPLC;determination. 三七素（dencichine），又名田七氨酸[1-3]，是五加科人参属名贵中药材三七中的主要止血活性成分。三七素首次于1981年由小菅卓夫提取分离并命名为dencichine，其化学名为β-草酰基-L-α,β-二氨基丙酸[4], 鲁歧[5]等又相继对其做了研究。目前主要采用氨基酸自动分析仪[2,3]，柱前衍生化高效液相色谱法[6]对三七素进行分析测定，这些方法由于仪器价格昂贵、处理困难等而未广泛应用。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪（戴安Summit），分析天平（上海天平仪器厂），三七根提取液由云南康恩贝植物药有限公司提供，含量测定用试剂为色谱纯，其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 色谱条件 Dikma C18色谱柱（5μ,150×4.6mm），乙腈-水（30-70），流速1mL/min，柱温25℃，检测波长213nm。该条件下三七素可达基线分离（分离度大于1.5）,保留时间为8.92 min(见图1、图2)。 2．2 溶液的配制 2．2．1 对照品溶液的配制 精密称取三七素对照品适量，用水超声溶解并稀释至刻度，摇匀制成0.4mg/mL的对照品储备液。 2．2．2 供试品溶液的配制 精密称取三七根提取液1.0177g，置25mL容量瓶中，用纯净水超声溶解并稀释至刻度，取一定体积的溶液稀释至一定浓度即可。 2．3 系统适用性实验与方法学验证 2．3．1 方法的线性与灵敏度 分别取对照品储备液0.1、0.5、1、2、3mL置10mL容量瓶中用甲醇稀释至刻度制成4、20、40、80、120μg/mL按照2.1项下测定三七素，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，线性回归方程为y=0.8452x-0.1145(r=0.9997)，线性范围为4-120μg/mL。 2．3．2 精密度试验 取浓度为40μg/mL的对照品溶液按照2.1项下进样20μL，连续进样8次，记录峰面积，结果三七素峰面积的RSD=1.86%，表明仪器精密度良好。 2．3．3 重现性试验 　　准确称取同一批三七根提取液样品5份，依供试品溶液的制备方法制取样品，依法测定含量，结果显示，三七根提取液中三七素的平均含量为1.97μg/mL，RSD为1.5 %。结果表明，本方法重现性良好。 2．3．4 稳定性试验 按2.2.2项，取供试品溶液2mL置10mL容量瓶中稀释至一定刻度，分别于0、2、4、6、8、10、12h，注入液相色谱仪20μL，进行测定，记录峰面积，结果三七素的峰面积的RSD为1.89%。结果表明，本品在12h内稳定性良好。 2．3．5 加标回收率试验 精密量取已知含量的同一样品适量6份分别置25 mL容量瓶中，(对照品浓度为0.4mg/mL)0.1mL，mg三七素，μg/25mL） 加入量（μg/25mL） 测得量（μg/25mL） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD (%) 50.17 40 89.91 99.35 98.51 0.61