中药及其制剂中丹皮酚的含量测定.doc

中药及其制剂中丹皮酚的含量摘　要：丹皮酚的含量是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及以其组方的制剂六味地黄丸等质量控制的重要指标。本文综述了近年含丹皮酚的中药材及中药制剂测定时的前处理条件和各种测定方法。 　　关键词：丹皮酚;牡丹皮;徐长卿;药物分析 　　牡丹皮为毛茛科芍药属牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)的干燥根皮，徐长卿为摩萝科植物徐长卿(Cynanchumpaniculatum(Bge.)kitag.)的根及全草。两者均是具有抗菌消炎作用的常用中草药，其主要有效成分均是丹皮酚(patpnol)。在常见的中药制剂六味地黄丸、金匮肾气丸、麦味地黄丸、当归养血丸等十余种中成药处方中均有配伍使用。丹皮酚含量是评价这些中成药质量的重要定量指标。中国药典(一九九五年版)规定六味地黄丸中丹皮酚含量是其定量指标之一[1]。由于中药材及其制剂成分十分复杂，若需要测定其中某一成分，样品的前处理是关键的一步，而处理方法又必须与选定的分析方法相适应。现将含丹皮酚的中药材及其制剂的样品处理和含量测定方法综述如下。 　　1、光谱法 　　1.1　紫外-可见分光光度法(Ultravioet-VisibleSpectrophotometry，UV) 　　紫外-可见分光光度法具有操作简单、费用较低等优点。但由于该法基本上没有分离能力，样品处理要求严格，故常被用于一般要求不很严格的测定以及中药材炮制方法、处理条件的比较、制剂工艺选择等方面。丹皮酚具有一定的挥发性，光谱法中样品处理一般都用水蒸气蒸馏或直接蒸馏法提取，以减少混入杂质，通常蒸馏液稀释后于274nm处测定吸收度。周玉生等[2]用该法测定了牡丹皮中丹皮酚含量，比较了不同加工方法的丹皮酚的含量：取已加工的牡丹皮样品适量，置蒸馏瓶中，加水约120mL，蒸馏后得馏出液约有95mL，稀释后在274nm测定吸收度。结果发现，水洗50烘干损失率最高，为34.96%;白酒喷淋晾干，损失率最低，为11.19%。毛黎明等[3]用水蒸汽蒸馏法测定了六味地黄的浓缩丸、口服液、胶囊三类制剂中丹皮酚含量，将试样蒸馏后，收集馏液约450mL，加水稀释，定容后，在270nm处测定吸收度。结果发现不同制剂含量有明显差别。周海梅等[4]将样品置烧瓶中，加水后直接蒸馏，收集蒸馏液，稀释后用UV测定，结果与水蒸气蒸馏提取测定无明显差异。陈文斗[5]利用丹皮酚能与对硝基氯化重氮苯在碳酸钠溶液(pH10.5～11.5)中偶合呈色的原理，测定了制剂中丹皮酚含量。其方法是将牡丹皮样品在P2O5真空干燥器中干燥至恒重，取粉末100mg加0.2%NaOH溶液振摇，静置过滤，取续滤液适量，加入乙酸钠缓冲液和偶合试剂，反应2min，再加入碳酸钠溶液，反应3min，定容，以溶剂加试剂同样处理后为空白，在480nm处测定吸收度，结果丹皮酚在6.02～30.1μmol/L范围成良好线性关系，丹皮酚回收率达(99.97±0.97)%。 　　1.2　胶束荧光法(MicellarFluorimetry，MCF) 　　胶束荧光法常用十二烷基硫酸钠(SDS)作为胶束试剂，SDS在水溶液中能形成一种亲水基团向外、疏水基团向内的有序排列。当浓度≥该试剂的临界胶束浓度时，在溶液中形成胶束。在胶束的胶核里有一个疏水环境，有利于极性较小的丹皮酚的溶解，提高了微环境里丹皮酚的浓度，特别是由于胶束的稳定作用，能提高荧光量子产率，使该方法的灵敏度得到提高。庞志功等[6]用该法测定了牡丹皮和徐长卿中的丹皮酚含量。样品用1mol/L的HCl-甲醇溶液浸泡1h后，氯仿提取，提取液浓缩至干，用V(氯仿)V(甲醇)=11溶解定容，取20μL，硅胶薄板点样，展开，刮取丹皮酚斑点，用φ=95%乙醇浸泡洗脱后，取适量，加2mLSDS溶液(1.5%)和水，快速混匀器上振荡5min，再用水定容，于EX275nm，EM550nm处测定荧光强度，丹皮酚在20pg/mL～800ng/mL浓度范围内成线性，r=0.9934，平均回收率94.2%(n=4)，最低检出限5.7pg。该方法操作简便，灵敏度高，适用于微量丹皮酚的测定。 　　2、色谱法(chromatography) 　　用于分析丹皮酚的色谱法有GC法、HPLC法、TLC法等，由于色谱法具有较高的分离能力和灵敏的检测能力，最适合于中药材及其制剂中有效成分的定性定量测定。 　　2.1　气相色谱法(Gaschromatography，GC) 　　气相色谱法具有很强的分离能力和很高的灵敏度，只需很少量的样品即可得到满意的结果。因此是分析成分复杂的中药中痕量成分的有效手段。为了增加检测灵敏度和选择性，并出于对色谱柱和检测器的保护，GC以及HPLC对中药样品的处理要求也较严格，除水蒸气蒸馏法外，还有多种其它有效的提取方法。杨昌金等[7]将六味地黄丸粉