实验三十三菠菜叶中叶绿素的提取.docVIP

实验三十三 菠菜叶中叶绿素的提取 一、实验目的： ⑴了解柱层析法分离菠菜叶中色素的原理和方法。 ⑵掌握柱层析操作技术。 ⑶学习薄层色谱法鉴定化合物的原理和操作。 ⑷学习萃取原理，掌握分液漏斗的使用方法。 二、实验原理： 绿色植物如菠菜中含有叶绿素（包括叶绿素a和叶绿素b）、叶黄素及胡萝卜素等天然色素。 叶绿素a为蓝黑色固体，在乙醇溶液中呈蓝绿色；叶绿素b为暗绿色，其乙醇溶液呈黄绿色。它们是吡咯衍生物与镁的络合物，是植物进行光合作用必需的催化剂，易溶于石油醚等非极性溶剂中。通常植物中叶绿素a的含量是叶绿素b的三倍。其结构式如下： 叶绿素a(R=CH3)和叶绿素b(R=CHO) 胡萝卜素是一种橙色的天然色素，属于四萜，为一长链共轭多烯，有α、β、γ三种异构体，其中β异构体含量最多。 β-胡萝卜素(R=H)和叶黄素(R=OH) 叶黄素是一种黄色色素，与叶绿素同存在于植物体内，是胡萝卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在石油醚中溶解度较小。秋天，高等植物的叶绿素被破坏后，叶黄素的颜色就显示出来。 本实验从菠菜叶中提取上述各种色素，并用柱层析法进行分离。 三、实验仪器与药品 ⑴仪器 研钵 分液漏斗 锥形瓶 酸式滴淀管 硅胶板 层析缸 ⑵药品 菠菜 石油醚 乙醇 无水硫酸钠 中性氧化铝 丙酮 正丁醇 蒸馏水 四、实验操作： ⑴取5克新鲜的菠菜叶子于研钵中捣烂［1］，用30ml 2:1的石油醚—乙醇分几次浸取。把浸取液过滤，滤液转移至分液漏斗中，加等体积的水洗一次，弃去下层的水-乙醇层。石油醚层再用等体积的水洗二次［2，3］，有机相用无水硫酸钠干燥后转移到另一锥形瓶中保存。取一半做柱层析分离，其余留作薄层分析。 ⑵柱层析分离：用25ml酸式滴淀管，20g中性氧化铝装柱。先用9:1的石油醚—丙酮洗脱，当第一个橙黄色色带流出时，换一接收瓶接收，它是胡萝卜素，约用洗脱剂50ml（若流速慢，可稍稍进行减压）。接着用7:3的石油醚—丙酮洗脱，当第二个棕黄色色带流出时，换一接收瓶接收，它是叶黄素，约用洗脱剂200ml。再换用3:1:1的正丁醇—乙醇—水洗脱，分别接收叶绿素a（蓝绿色）和叶绿素b（黄绿色），约用洗脱剂30ml。 ⑶鉴定：取一10×4cm2的硅胶板，在板的一端约1~1.5cm处用铅笔轻轻画一条直线作为起点。用分离后的叶绿素a和叶绿素b点样，用石油醚展开，当展开剂前沿上行到板另一端约1cm时，立即取出并作好记号。晾干后量下斑点所走的距离，计算Rf值。 五、注释 ［1］研磨只可适当，不可研磨得太烂而成湖状，否则会造成分离困难。 ［2］洗涤时要轻轻振荡，以防止产生乳化现象。 ［3］水洗的目的是除去有机相中少量的乙醇和其它水溶性物质， 六、思考题 ⑴为什么极性大的组分要用极性大的溶剂洗脱？ ⑵如果柱子填充不均匀或留有气泡，会对分离有何影响？如何避免？ ⑶什么叫Rf值？为什么利用它能鉴定化合物？ ⑷展开前展开剂的高度如果超过了点样线，对薄层色谱有何影响？