实验六甘草中总黄酮的提取和检测.pdfVIP

实验六 甘草中总黄酮的提取和检测 一、实验目的和要求 1．熟悉甘草中总黄酮的提取方法和工艺； 2 ．掌握分光光度法测定物质含量的方法。 二、实验原理 甘草黄酮是从特定品种甘草中提取的天然美白剂，它能抑制酪氨酸酶的活 性，又能抑制多巴色素互变和 DHICA 氧化酶的活性，是一种快速、高效、绿色 的美白祛斑化妆品添加剂。 甘草黄酮易溶于有机溶剂， 根据活性成分的特性，本实验主要采用了简单 易行、比较常用的溶剂提取法来进行有效成分的提取。溶剂提取法按其实现方式 和操作工艺的不同，可分为以下几种：a. 浸渍法；b. 渗漉法；c. 煎煮法；d. 回 学 流提取法等。由于回流提取法是利用易挥发的有机溶剂进行加热提取，并采用冷 大 却装置使溶剂连续回流，使植物有效成分能充分提出，且此法简单易行，溶剂用 量少，提取较完全，故本实验中采用了索氏回流提取法。 技 采取索氏回流提取法从甘草中提取总黄酮的工艺流程如图1所示。 科 古 图1 甘草中总黄酮的提取工艺流程图 蒙 分光光度法测定原理 分光光度法既能进行定性又能进行定量测定，它是根 据物质对紫外区域的光或可见光的选择吸收性，进行物质定性、定量分析的一种 内 方法。显色反应的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时溶液的浓度、显色时 间等；测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长、吸光度范围和参比溶液等。 用分光光度法测定甘草提取液和提取物中总黄酮含量是目前国内普遍采用方法。 该方法采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法，以芦丁为标准品，在510nm波长处测定。 其基本原理是：黄酮母核上3和(或)5位上的H或OH取代时能与铝离子形成络合 物；此外B环上有任何相邻的双羟基时，也能产生络合作用(其形成的络合物结构 如图2所示) ，从而在吸收光谱上发生明显变化，可作为定量测定的依据：不同结 构的黄酮类化合物，显色情况不同，因此要选用标准品，可用本法测定总黄酮含 量。本实验选用为芦丁标准品（纯度大于95% ）。 图2 铝离子与黄酮形成的络合物结构 3+ Fig.2 Structures of Al -flavone complexes 回流提取装置图 如图 3 所示。 学 大 技 科 古 图3 索氏提取装置图 蒙 Fig.3 Apparatus of Soxhlet extraction 内1-铁架台 2- 电热套 3- 圆底烧瓶 4-冷凝管 5-萃取物料 6-索氏萃取管 三、实验步骤 1.甘草总黄酮的提取 准确称取烘干过 60 目筛子的甘草粉末3.0g，用精密 滤纸包好，置于 500mL 索氏提取器中，加入 400mL 无水乙醇提取至流出液无色， 大约 4h 后取出提取液，自然冷却备用。 2 ．甘草中总黄酮的测定 (1)标准溶液的配制 将芦丁标准品于 120℃下干燥至恒重，精确称取芦丁标准