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(3)保留指数 保留指数计算方法 　　小的颗粒有利于降低Ａ，但小颗粒填料不易填充均匀，同时降低了柱渗透性。 色谱基本概念与理论 Concept and theory 0.09 8 0.004~0.007 200~400 0.14 3 0.015~0.03 50~100 0.12 1 0.04~0.08 20~40 A(cm) λ dp(cm) 筛目 填料粒径对Ａ项的影响 2)分子扩散项—B B = 2γDg γ ：弯曲因子，填充柱γ=0.5~0.7，毛细管柱γ=１。 Dg：试样组分分子在气相中的扩散系数（cm2·s-1）。　　 　　由于柱中存在着浓度差，产生纵向扩散： 扩散导致色谱峰变宽，H↑(n↓)，分离变差　 b. Dg与流速有关，流速↓，滞留时间↑，扩散↑ c. 与温度成正比，Dg ∝（M载气）-1/2；M载气↑，B值↓ 色谱基本概念与理论 Concept and theory 谱带扩展与溶质在体系中停留时间的平方根成正比，与溶质在柱床中移动距离的平方根成反比。 色谱基本概念与理论 Concept and theory 3)传质阻力项— C 　　由于溶质分子与固定相、流动相分子间相互作用，阻碍溶质分子快速传递实现分布平衡，导致有限传质速率的分子间作用力------传质阻力 　　传质阻力包括气相传质阻力Cg和液相传质阻力CL ，液相传质阻力大于气相传质阻力。 即： 　　 C =（Cg + CL） 色谱基本概念与理论 Concept and theory d?为固定液液膜厚度，ＤＬ为溶质在固定液中的扩散系数。 色谱基本概念与理论 Concept and theory 色谱基本概念与理论 Concept and theory 传质阻力引起非平衡过程示意图 4)载气流速与柱效-最佳流速 载气流速高时： 传质阻力项是影响柱效的主要因素，流速↑，柱效↓。 H - u曲线与最佳流速： 以塔板高度H对应载气流速u作图，曲线最低点的流速即为最佳流速。 载气流速低时： 分子扩散项成为影响柱效的主要因素，流速↑ ，柱效↑ 。 色谱基本概念与理论 Concept and theory 5)速率理论的要点: (1)组分分子在柱内运行的多路径与涡流扩散、浓度梯度所造成的分子扩散及传质阻力使气液两相间的分配平衡不能瞬间达到等因素是造成色谱峰扩展、柱效下降的主要原因。 (2)通过选择适当的固定相粒度、载气种类、液膜厚度及载气流速可提高柱效。 色谱基本概念与理论 Concept and theory (3)速率理论为色谱分离和操作条件选择提供了理论指导。阐明了流速和柱温对柱效及分离的影响。 (4)各种因素相互制约，如载气流速增大，分子扩散项的影响减小，使柱效提高，但同时传质阻力项的影响增大，又使柱效下降；柱温升高，有利于传质，但又加剧了分子扩散的影响，选择最佳条件，才能使柱效达到最高。 色谱基本概念与理论 Concept and theory 色谱基本概念与理论 Concept and theory ５.柱外效应 　　色谱区带的总方差等于柱内、柱外各种独立因素方差之和： 　　?２总＝ ?2柱内＋?2进样＋?2连接＋ ?２检测＋ ?２其它 　　研究柱外效应，常用柱外效应引起峰体积的相对增大值作为度量柱外效应的指标。 色谱基本概念与理论 Concept and theory 　　峰体积VP与柱管体积VC 、柱孔空隙εＴ成正比，而与柱效，即理论塔板数平方根成反比，并随溶质k增加而增加。 一般要求： 　 柱外效应引起峰扩张≤总色谱峰扩张的10%　 色谱基本概念与理论 Concept and theory １）进样------柱外效应引起的色谱峰扩张的主要原因 Huber经验规则：　　　最大进样体积为色谱峰体积的四分之一。 ２）连接管------溶质分子在管中纵相或轴相分子扩散引起的　　高效液相色谱中，若控制连接管色谱峰扩张的分量θ２为1％，0.25mm内径连接管应保持在100mm以内。 ３）检测器------色谱检测器流通池的结构、体积、流体流动状态、检测器响应时间都会影响色谱峰的扩张。 　　只要检测池的体积小于色谱峰体积的十分之一，检测池产生的柱外色谱峰扩张就不显著。 ６.分离度 塔板理论和速率理论都难以描述难分离物质对的实际分离程度。即柱效为多大时，相邻两组份能够被完全分离。 难分离物质对的分离度大小受色谱过程中两种因素的综合影响： 　　保留值之差──色谱过程的热力学因素； 区域宽度──色谱过程的动力学因素。 色谱基本概念与理论 Concept and theory 色