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影响测定反相高效液相色谱流动相pH值的因素 宋永康 郭 嘉 潘 葳 （福建省农业科学院中心实验室福州 350003） E-mail:songlibby@sohu .com 摘 要 以采用反相高效液相色谱法测定九种有机酸为例，探讨了流动相pH值对分析结果的影响。实验结果表 明pH=2.40时，九种有机酸得到有效分离，且峰形理想，而不同pH值对分析结果影响很大，不仅会大大改变各有机 酸的保留值，甚至会导致无法将各有机酸分离。本文分析了影响测定流动相pH值的因素。 关键词 反相高效液相色谱；pH值；酸度计 中图分类号O657.7 The Factors of Affecting Determining pH Value of RP-HPLC Mobile Phase Song Yongkang, Guo Jia, Pan Wei (Central Laboratory, Fuj ian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350003, China) Abstract work. Key words 1 引 言 仪器：PHS-3C数字式酸度计,Waters 2695型高效液 相色谱仪，Waters 2996二极管阵列检测器， Empower 应用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分析测定 色谱工作站，超声波清洗器， XW-80A旋涡混合器，微 时，常常采用离子抑制法即向含水流动相中加入酸、 量可调移液器。 碱或缓冲溶液等改性剂，以使流动相的pH值控制一 2.2试剂 定数值，抑制溶质的离子化，减少谱带拖尾、改善峰 磷酸、磷酸二氢钾、有机酸标准品均为分析纯。 [1] 形，以提高分离的选择性 。例如在分析有机弱酸时， 0.04moL/L KHPO-HPO缓冲溶液:称取分析纯磷酸 2 4 3 4 常向流动相中加入磷酸(或乙酸、三氯乙酸、1%的甲 二氢钾5.44g，用水溶解并定容至1000mL，用磷酸调至 酸、硫酸)，就可抑制溶质的离子化，获对称的色谱峰。 pH2.4。然后用0.45μm水相滤膜过滤，再经超声波脱 对于弱碱性样品，向流动相中加入1%的三乙胺，也 气后用作流动相。 [2~6] 可达到相同的效果 。 虽然RPC方法建立时最好选用 九种有机酸标准溶液的配制：分别准确地称取草 pH微小改变不影响分离的流动相，但pH值的较大变 酸300mg，酒石酸700 mg，丙酮酸20 mg，苹果酸1g， 化往往会对分析结果产生很大影响，因此流动相pH值 柠檬酸2g，琥珀酸6g，富马酸30 mg，乳酸5g，乙酸 的调节是分析过程中至关重要的一个环节，本文以反 5g，置于100mL棕色容量瓶中，用流动相溶液溶解并 相高效液相色谱法测定九种有机酸为例考察了不同流 定容至刻度。上述溶液经不同浓度稀释后，上机并绘 动相pH值对分析结果的影响，指出准确调节流动相 制各种有机酸的标准曲线。溶液用前经0.45μm样品 pH值的关键所在，有助于提高分析结果的准确性。 过滤器过滤.配制试剂所用的水均为二次蒸馏水。 2.3　色谱分析条件 2　实验部分 TM