不同方法诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化.pdfVIP

苏州大学学报(医学版)2009；29(2) 197 · 基础医学 · 不同方法诱导大鼠骨髓间充质干细胞 向神经样细胞的分化 徐路尧，宋 琳 ，钱燕翔，王 敏 ，包普花，张焕相 (苏州大学医学部基础医学与生物科学学院 细胞生物学系，江苏省干细胞研究重点实验室，江苏苏州 215123) 摘要：目的 观察两种方法体外诱导大 鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向神经样细胞分化的效果。方法 自大鼠股 骨中提取骨髓细胞，利用Percoll法进行BMSC分离、纯化及鉴定。取第 5代细胞，应用两种方法进行诱导。方法一 (BHA组)：200I．Lmol／L丁羟基茴香醚 (BHA)、10ng／n~碱性成纤维生长因子(bFG 和2％二甲基亚砜 (DMSO)联合诱 导细胞；方法二 (RA组)：全反式维甲酸(RA)和 13一巯基乙醇(p—ME)联合诱导细胞。同时设正常培养的BMSC为对照 组。实验过程中对细胞进行形态观察和免疫荧光染色检测神经细胞标志物。结果 BHA组诱导5h，细胞即发生明显 的形态改变，出现胞体回缩、突触伸展等神经干细胞的形态特征，而 RA组诱导 1周未出现神经干细胞形态。免疫荧 光染色显示两种方法诱导的细胞均能表达神经前体细胞标志物nestin、[3-tubulin和成熟神经元标志物神经元特异性 烯醇化酶(NSE)，不表达星形胶质细胞标志物胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)。BHA组与RA组表达NSE的阳性率分别 为80．05％和 71．61％，两者相 比，差异无统计学意义(P0．05)；对照组不表达NSE，诱导组与对照组比，差异有统计学 意义 (P0．05)。结论 两种方法均能诱导骨髓间充质干细胞定向分化为表达神经细胞标志物的神经样细胞。 关键词 ：骨髓间充质干细胞；诱导分化；神经样细胞；丁羟基茴香醚；全反式维 甲酸 中图分类号：R329．21 文献标识码 ：A 文章编号：1673—0399(2oo9)02-0197-04 DifferentiationofRatBoneMarrow MesenchymalStem CellsintoCells 、)l，ithaNeuralPhenotypebyTwoSpecificTreatments XULu-yao，SONGLin,QIANYan-xiang,WANG BA0Pu-hua,ZHANGHuan-xiang (DeptofCellBiology，SchoolofBasicMedicineandBioscience，MedicalCollegeofSoochowUniversity， KeyLaboratoryofStemCellResearchofJiangsuProvince，JiangsuSuzhou 215123，China) Abstract：Objective Tostudythedifferentiationofratbonemarrowmesenchymal stem cells (BMSCs)intocellswithaneuralphenotypebytwospecifictreatmentsinvitro．Methods Isolation， cultivationandamplificationofBMSC，andthepurifiedBMSCsofthefifthgenerationwereinducedto differentiateintoneuron—likecellsbyusingtwotreatments：(1)treatmentwith200I*mol／Lbutylatedhy— droxyanisole(BHA)incombinationwith10ng／m~bFGFand2％DMSO；(2)1txmol／Lretinoicacid(RA) incombinationwith100ixmol／LB—ME．Morphologicalchangesofcellsduringtheinductionbytwo treatmentswereobservedundermicrosc