西洋参根表达序列标签(EST)文库构建及功能基因发掘.pdfVIP

西洋参根表达序列标签（EST ）文库构建及功能基因 发掘 1 2 1 * 1 2 2 1 1 陈士林 ，孙永巧 ， 宋经元 ，李滢 ，李晨吉 ，胡松年 ，李西文 ，姚辉 ， 张晓伟2 * 1. 中国协和医科大学，中国医学科学院，药用植物研究所，北京（100094 ） 2. 中国科学院北京基因组研究所，北京（100029 ） E-mail: slchen@, jysong@ , zhangxw@ 摘 要：为研究西洋参根的基因表达谱和挖掘其功能基因，采用表达序列标签（EST ）技术 成功地首次建立了四年生西洋参根的 EST 文库。通过 BLAST 与 Gene Ontology 分析获 得与人参皂甙生物合成相关、编码 P450 和糖基转移酶等的基因序列 11 个，与生长素调节 生长发育相关、编码生长素响应因子4 和生长素调节蛋白等的基因6 个，与水分胁迫相关、 编码蛋白 dehydrin 和 DC2.15 like 蛋白等的基因 7 个，与编码抗氧化酶如 peroxidase 和 catalase 相关的基因6 个。而且，从西洋参根的 EST 文库获得抗病基因12 个，分别编码转 录因子 WRKY 家族蛋白和 ribonuclease 蛋白家族等，62 个 EST 是其他物种尚未报道的 新基因。可见，EST 技术作为功能基因组研究的重要手段可在西洋参功能基因的开发与研 究中发挥重要作用，这些基因的发现为进一步克隆基因全长、研究基因功能、改良西洋参品 质、阐明西洋参生长缓慢的分子机制等方面奠定了基础。 关键词：表达序列标签；功能基因；西洋参 西洋参（Panax quinquefolium L. ）为五加科（Araliaceae ）人参属名贵药材，以根入药， 原产于北美洲（主要是美国和加拿大），上世纪八十年代我国引种栽培成功，主要引种区域 包括北京、吉林、陕西、山东等地[1] 。西洋参具有促进记忆、抗癌、降血压、降血脂、抗缺 氧和抗疲劳、抗糖尿病、强心、镇静等多种药理作用[2-5]，与同为五加科的名贵药材人参相 比，其性较温和。现代化学及药理学研究表明西洋参含有生理活性物质皂苷、多糖、黄酮类、 [2, 6]，人参皂苷含量是衡 挥发油、微量元素等，其主要有效成分是人参皂苷（Ginsenosides ） 量西洋参产品质量的重要指标。研究测定 1 ~ 5 年生西洋参根总皂苷含量分别为 3.89% 、 4.33% 、5.24 %、6.23 % 和 6.49% ，可见，西洋参根部总皂甙含量随着参龄的增长而增加， 四年生西洋参根中总皂甙含量已达较高水平。 由于受自身的生理特性限制，西洋参生长缓慢，一般需 4 ~ 6 年才能收获入药，随着对 西洋参需求的增加，可供利用的资源已严重不足，而且西洋参存在连作障碍，20 年内不能 重茬，适宜栽培地的缺乏制约了西洋参产业的发展。本研究利用植物功能基因组学的技术方 法[7]，以四年生西洋参根为研究材料，构建了西洋参根的 cDNA 文库，对 cDNA 的 5′ 端 进行测序，构建 EST （Expressed Sequence Tags，表达序列标签）文库，并进一步应用生物 信息学方法进行 EST 的功能分类研究。试图从功能基因组水平上研究西洋参一系列重要基 因的表达及其功能，这些重要基因包括有效成分生物合成相关的关键酶基因、生长发育相关 基因、与胁迫等相关的抗性基因等，为解决西洋参生长缓慢、连作障碍、人参皂苷积累周期 长等问题奠定基础，对西洋参优良品种的分子设计、产业化发展、满