Akt1和Akt2基因转染对人胃黏膜上皮细胞GES-1侵袭和迁移的影响.pdfVIP

天津医药2011年4 月第39卷第4期 295 doi:10.3969/j.issn.0253-9896.2011.04.003 Akt1和Akt2基因转染对人胃黏膜上皮细胞GES-1 侵袭和迁移的影响* △ 谢甲贝 张庆瑜 康春生 韩 静 王 涛 张 洁 摘要 目的:观察蛋白激酶B1（Akt1）和蛋白激酶B2（Akt2）基因转染人胃黏膜上皮细胞系GES-1后对其侵袭和迁 移的影响。方法:采用脂质体法将分别含Akt1和Akt2基因全长cDNA序列的p-LXSN-Akt1（Akt1组）和p-LXSN-Akt2 （Akt2组）质粒转染到GES-1细胞，以转染p-LXSN空载质粒的细胞为空载组，以正常未转染细胞为对照组，并经抗生 素G418筛选抗性克隆，蛋白印迹（Westernblot）鉴定各组细胞Akt1、Akt2及基质金属蛋白酶（MMP-）2的蛋白表达水 平；Transwell法分析转染后细胞的侵袭能力；用免疫荧光法观察转染后GES-1细胞丝状肌动蛋白（F-actin）的变化。 结果： Akt1组和Akt2组均获得了稳定表达Akt1和Akt2基因的GES-1细胞模型；2组MMP-2蛋白表达均高于空载组和 对照组（P 0.01）。Transwell法显示Akt1和Akt2组GES-1细胞侵袭能力均明显增加（P 0.01）。免疫荧光发现Akt1 结论： 和Akt2组F-actin的聚集均增加。 Akt1、Akt2基因均可以通过增加细胞侵袭力和迁移力，导致GES-1细胞恶性 转化。 关键词 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 胃黏膜 上皮细胞 细胞系 基质金属蛋白酶9 肌动蛋白类 肿瘤转移 Effects of Akt1 and Akt2 Gene Transfection on Invasion and Migration of Human Gastric Epithelial Cell GES-1 XIEJiabei,ZHANGQingyu,KANGChunsheng,HANJing,WANGTao,ZHANGJie General Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300052,China Abstract Objective: ToobservetheeffectsofproteinkinaseB1(Akt1)andAkt2genetransfectiononinvasionandmi⁃ grationofhumangastricepithelialcelllineGES-1. Methods: Theplasmidofp-LXSN-Akt1,whichcontainedthewhole Akt1genesequence,andp-LXSN-Akt2,whichcontainedthewholeAkt2genesequence,wereusedtotransfectGES-1cells withlipofectamine.TheGES-1cells,whichweretransfectedbytheemptyvectorp-LXSN,weretheblackvector,andtheno transfectedoneswerethecontrol.AndthenthepositivecellcloneswereselectedwithantibioticsG418.Theproteinexpres⁃ sionsofAkt1,Akt2andMMP-2weremeasuredbyWesternblottinganalysis.Transwellassaywasusedtoanalyzetheinva⁃