石斛兰的组织培养.docVIP

石斛兰的组织培养 作者：杨恩富 专业：设施农业技术 班级：设农08-1班 学号：33号 指导教师：陈霞 [摘要]：运用组织培养相关知识，对石斛兰做了简单的组织培养阐述。大致方向为：（一）培养目的——通过石斛兰的组织培养，加强我对石斛兰的了解以及石斛兰在组织培养中所注意的事项，同时为学习组织培养这门课程打下坚实的基础；（二）培养方法——选择石斛兰的叶片、茎段腋芽、根系在营养基中进行组织培养 ；（三）简单介绍石斛兰生根培养和炼苗技术。 通过本篇论文，加强自身对石斛兰的了解，并对其生理特性有一定的认知。组织培养技术，用组织培养法繁殖植物，这是组织培养应用于生产的主要的和成效最大的实例。所以，石斛兰的组织培养，更加肯定了组培价值所向。 关键词：石斛兰 组织培养 炼苗 一、石斛兰(Dendrobium) 的概述 石斛兰(Dendrobium)属兰科多年生附生落叶或常绿草本植物，原产中国、日本及澳大利亚等国家，是一种观赏价值很高的花卉，其花姿态优美，花色艳丽多彩，花多而且花期长，深受人们喜爱。石斛兰有600种原生种 ，连混合交配种在内约有7000种。从形态上可分节生种和蝴蝶兰花形种两大类。在繁殖上，因为几乎所有的观赏类石斛都是杂种，通过种子播种不能得到大量与亲代形状一致的植株。目前石斛兰主要采用分株繁殖，繁殖速度缓慢。我国从20世纪70年代中期开始，对石斛的组织培养进行了大量研究，进展很快。但目前石斛兰的组织培养采用的外植体基本上都是茎尖、新生芽，由于每株植株体上这些材料有限，所以茎尖、新生芽作为外植体材料的组织快繁在生产上应用难度较大。虽然通过叶片诱导能够诱导出类原球茎 ，如Sagwa等采用幼茎的侧芽和顶尖的分生组织分化出类原球茎 。但由于石斛兰类原球茎的诱导机理没有研究清楚，通过类原球茎分化完整植株的途径还有很大的难度。 二、外植体的选择 无菌外植体的获得:从无病虫害的母株上选择健壮、叶片未展开的幼芽，用已消毒的刀片切取4～12cm，并将外围叶片剥除,仅留顶端 O – 3cm叶鞘 ，放入锥形瓶中，用纱布封闭瓶口，自来水流水冲洗 3 0 min，然后用 7 0 ％酒精消毒1min，1‰ HgCl，处理 8min,最后用无菌水洗 4～5次,将外植体置入无菌烧杯,切取的芽体直径约 1.2cm、高 2.0 ～ 5.0c m，呈锥螺状，具顶芽 1个、腋芽 3 ～ 4个( 每层各有 1个) 。将芽体用 0.1 ％升汞溶液浸泡10min、无菌水冲洗 3～5次后、切除叶鞘。然后将顶芽与腋芽分开，取从下往上数第 2～3个腋芽作外植体( 第 1 个腋芽较难消毒，第 4个芽易成苗、较难诱导出原球茎),备用。 三、石斛兰各组织诱导 石斛兰叶片愈伤组织的诱导、石斛兰茎段腋芽的诱导、石斛兰根系的诱导。 （一）石斛兰叶片愈伤组织的诱导 1.叶片愈伤组织诱导培养基 叶片愈伤组织诱导培养基以MS为基本培养基，根据生长调节剂的组成、浓度设5个处理。 处理 A：MS+2，4-D5.0mg/L; 处理B: MS+2, 4-D5.0mg/L+ 6-BA1.0mg/L; 处理C:MS+ 2,4-D5.0mg/L+6-BA3.0mg\L; 处 理 D,MS+2,4-D 3.0m g/L+6 - B A1.0mg/L； 处理 E，MS+2，4-D3.0m g／L 。5种叶片愈伤组织诱导 培养基中均附加琼脂 6dE，蔗糖 2 OL，活性炭 3L，p H值为 5.4～ 5.8 。 2.叶片愈伤组织切块大小 将无菌的幼嫩叶片,用解剖刀切成 1c m×1c m的小块,接种在诱导培养基上。 3.培养条件 温度为25℃，日光照12h，光照强度2 0 0 0LX 。 （二）石斛兰茎段腋芽的诱导 诱芽培养基 以 MS为基本培养基 ， 根据生长调节剂 的种类和浓度设 3个处理： 1. MS+6-BA 4 .0 mg / L+N A A1.0 mg /L ； 2. MS+ 6 - B A 4. 0mg/L+N A A/1.0mg/ L+K T 1.0m g/ L ； 3. MS+6-B A 0.5m g/L+N A A 0. 5mg/ L+C H 1. 0 m g/ L 。 取无菌茎段 ，将两端用无菌解剖刀轻轻削去 2～3n l/ n ，将其接种到诱芽培养基上。 （三）石斛兰根系的诱导 设 3个不同的改良的 1/ 2 MS培 养基处理。处理 1 : 1/2 M S+I B A 2. 0 m g/ L ； 处理 2:1 / 2 MS+I B A2.0 m g/ L+肌醇 2. 0mg/ L ； 处理 3: 1/ 2 MS+I B A 2 ． 0 m g ／ L+香蕉汁 1 0 ％。培养基中内含物同“ 1.2.2 ”。选取生长