石斛叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立及优化.pdfVIP

浙江农业学报Actadg 妇口 Zhejiangensi~21(3)：230～233，2OO9 石斛叶片蛋白质双 向电泳技术体系的建立及优化 董 婧，应奇才，王慧中 (杭州师范大学生物化学与分子生物学杭州市重点实验室，浙江 杭州 310036) 摘 要：以石斛叶片为材料，建立了一套适用于石斛蛋白质组分析的双向电泳体系，探讨了石斛叶片蛋白的 提取、蛋白定量以及双向电泳的一些关键技术。结果表明，通过三氯乙酸(TCA)法提取、高压等电聚焦和两步 平衡等方法可以获得稳定、清晰的双向电泳图谱 ，获得了可分辨蛋白质斑点数约613个。 关键词：双向电泳；蛋白质组；石斛 中图分类号 ：$682．31 文献标识码：A 文章编号：1004—1524(20o9)o3—0230—04 Establishmentand optimization analysisofdendrobium DONGJing，YINGQi-cai，WANGHui—zhong (研 LaboratoryofMolecularBiologyandBiochemistryofHo~ o．， 咖 Normalw,~ ity，硪 勘 310036， China) A 缸口噍：A2-D(two-dimensionalelectrophoresis)protocolsuitableforproteinanalysisindendrobiumleafWSSsetup．1he proteinextractionandproteinexcretion．aswellassomekeytechnologiesof2-D electrophoreshwerestudied．Theresults showedthatstableandclear2Dmapswithabout613proteinspotscouldbeobtainedth~oaghthemethodsofextractionwith trichloroaceticacid，isoelectricfocusingunderhigh-voltageandtwo-stepequilibrium． Key啊 ：wt-odimensionalelectrophoresis；proteome；Dendrobium orchids 石斛又称石斛兰 (D．orchids)，为兰科石斛 斛在市场上供应的紧张状况提供依据。 属(Dendrobium)，是兰科中的第二大属，主要分 目前国内对石斛的研究多集中于野生石斛 布于亚洲热带和亚热带地区至大洋洲，全世界大 的驯化及种子生产、遗传多样性、引种栽培、育 约有 1500多种，在我们国家大约有 70多种_lJ。 种、组织培养等方面，而对其蛋白质组学的研究 石斛是我国中草药领域常用的一味强阴益精的 报道较少。随着功能基因组学的兴起，蛋白质组 中药，作为中药材，药用价值很高，是药材中的佳 学技术方法在植物抗逆性研究中的应用 日益广 品，如铁皮石斛在民间有 “救命仙草”的美誉。由 泛和深入。自1975年O’Farrell提出高分辨率双 于石斛生长条件的特殊性和分布的局限性，又经 向电泳技术 (two-dimensionalgelelectrophoresis)以 长期采挖，自然资源濒临枯竭，因此探索石斛的 来l22J，该技术有了长足的发展，并与质谱技术、生 抗逆机制，可以为扩大石斛的产地范围，缓解石 物信息学相连成为蛋白质组学研究的三大核心 技术。作为蛋白质组学中一个关键性技术，高分 收稿 日期：200B一04—05 辨率的双向电泳使科研工作者对组织或细胞的 基金项 目：国家 自然科学基金 姗 0185)；浙江省自然 总蛋白质的综合分析成为可能 3。近年来双向 科学基金(3o5692,3