D-核糖交联胶原膜的性质研究.pdf

史佳娩等：D核糖交联胶原膜的性质研究 D一核糖交联胶原膜的性质研究’ 史佳巍1，李学敏1，刘玲蓉1，关墁1，张其清1’2 (1．中国医学科学院生物医学工程研究所，天津市生物材料重点实验室，天津300192； 2．厦门大学生物医学工程研究中心，材料学院生物材料系， 福建省生物医学工程重点实验室，厦门市生物医学工程技术研究中心，福建厦门361005) 摘 要： 根据关拉德反应(Maillardreaction)原理，炎症反应，但这些抗生素和抗炎剂可能使胶原材料在 以肛核糖为交联荆，氨水为pH调节剂，对胶原膜交联 应用过程中产生副作用。其次，胶原的交联反应主要 条件进行优化。对交联的胶原膜与未交联胶原膜进行 是氨基与其它活性基团的反应，所以最佳交联pH值 XPS、IR、AFM、SEM表征，进一步考察了胁核糖与甲应为中性或弱碱性。胶原材料制备过程中通常用酸溶 醛分别交联得到的胶原膜对I型胶原酶的耐受性。研 究结果表明，在对酶的耐受性方面经肛核糖交联的胶 难将交联液维持在中性或偏碱性的环境。 原膜等同于甲醛交联的胶原膜。 本研究对胶原的交联工艺进行优化，选择本室自 关键词：胶原膜；交联剂；胁核糖；美拉德反应 制牛I型胶原为原料，肛核糖作为交联荆，用氨水调节 中图分类号：R318．08 文献标识码：A 交联液的pH值对胶原膜进行交联。D核糖为天然的 文章编号：1001-9731(2009)06-1013-04小分子单糖，无毒，可避免醛类等交联剂引起的不良后 果；为使胶原大分子中失去以氢键结合的水，更利于交 1 引 言 联反应．并且使胶原膜结构更加致密，以丙酮作为脱水 胶原具有优良的生物相容性、可降解性、低免疫原 荆。对交联处理后的胶原膜进行了XPS和H卜IR检 性等特点，在生物医用材料领域得到了广泛的应 测，并利用AFM和SEM对其进行表征。进一步将胁 用[1_3]。由于降解速度太快，作为体内植入材料常要核糖交联的胶原膜与甲醛交联的胶原膜进行对I型胶 对其进行交联改性以满足临床需要。 原酶耐受性比较。 目前，胶原的交联方法以化学交联为主。常见的 2 实 验 化学交联荆有醛类(甲醛、乙二醛、戊二醛等)、碳化二 亚胺类、双环氧类物质(环氧氯丙烷，环氧乙烷等)以及 2．1主要原料与仪器 氰酸盐等n’5]，但这些化学交联剂均具有很高或相对较 实验室常规酶消化法提取制备的胶原溶胀液，羟 高的细胞毒性。研究表明，即使戊二醛残留质量浓度 低至3．0mg／L时仍有毒性，其未发生反应的醛基或交(合肥博美生物科技有限公司)，柠檬酸，柠檬酸钠，氯 联胶原膜在酶的作用下降解所释放的醛类物质均可能 胺一T，甲醇，对二甲氨基苯甲醛，高氯酸，氢氧化钠，浓 引起细胞毒性反应【6]。 盐酸，甲基红．乙醇，甲醛，丙二酸，丙酮，氨水均为分析 美拉德反应(Maillardreaction)是蛋白质与还原纯。 性单糖间的非酶糖基化反应。胶原的美拉德反应现象 被称作胶原的糖基化[7]。有学者利用美拉德反应将 D核糖作为交联剂对鼠尾胶原进行交联，室温下在 PBS(pH=7．4)缓冲液中反应110h后将材料冻干，以 材料为支架培养成纤维细胞。结果显示，用此方法交 联得到的胶原海绵具有优良的细胞相容性和促进细胞 冷冻离心机(DLL4A，江苏太仓县医疗器械厂)，数显 生长的作用，并且交联过程中未引人具有细胞毒性的 TOLEDO公司)．带酶标仪的 pH计(瑞士METTLER 有机化合物【8】。但这种交联方法存在两点不足。首 先，室温、中性环境下和较长的交联时间可能引起微生 平，恒温水浴锅，空气浴摇床。