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iPS诱导性多能干细胞的研究与进展.doc
诱导性多能干细胞的研究与进展
陈莽昆
【摘要】2012.157山中伸弥由于发明诱导多功能干细胞(iPS cell)技术而获得2012年诺贝尔奖。干干干(l)由囊胚内细胞团分离,进而在体外培养建立人或不同动物的干(2)体细胞核移植,(3)体细胞与多潜能细胞融合后的重编程而获得干(4)将分化的体细胞在卵细胞或多潜能干细胞的抽提物中孵育以实现体细胞重编程而获得干;通过以上这些方法虽然可以获得干干iPS细胞不受这些问题限制且制备简单易行,故iPS细胞一问世,即在生命科学领域引起了巨大轰动,成为生命科学领域新的里程碑。
【关键词】iPS Cell;诱导性多能干细胞;胚胎干细胞;转录因子
1 iPS 细胞的产生
什么是iPS 细胞呢?简单来说就是借助基因导入技术将某些特定因子导入动物或人的体细胞,同时可选择性地在培养液中加入特定的小分子物质,即可将体细胞重编程为多潜能干细胞,此类细胞在克隆形态、生长特性、表面标志物、基因表达模式、表观遗传学特征、拟胚体(embryoidbodies,EBs)形成、畸胎瘤(teratoma)形成和嵌合体(chimeras)形成(针对小鼠)等方面与ES 细胞非常相似。
细胞的全能性和多能性通常只存在于早期胚胎细胞,最近研究发现,许多成年体细胞通过处理仍然具有发育的多能性[1] 。目前获得iPS 细胞的方法有多种,主要包括: ①体细胞核移植:将体细胞核导入到去核的卵母细胞,使体细胞核在去核的卵母细胞重新编程而获得类似于ES 细胞的发育多能性[2] ;②细胞融合:将哺乳动物的成年体细胞和具有多能性的ES 细胞融合可产生四倍体细胞,这种四倍体细胞具有发育的多能性[3] ;③体细胞核直接重编程:即将Oct4 , Sox2 , Klf4和 c-Myc 四种转录因子通过病毒或质粒载体导入到体细胞中,使体细胞核重编程而获得发育的多能性[4,5] ;④细胞培养:将生殖细胞置于特定培养条件下进行培养,可使生殖细胞重新编程变成多能性细胞[6] 。由此可见多能性诱导因子可能在维持类似于ES 细胞的多能性中起非常重要的作用。[7]
2 发展历程
2006 年8 月,Yamanaka 小组将24种转录因子排列组合导入小鼠成纤维细胞,最终确定最少有4种转录因子组合——Oct4、Sox2、c-Myc 和Klf4 即可将成纤维细胞重编程为iPS 细胞;2007 年11~12 月,Yamanaka 小组和Thomson 小组先后将人的体细胞重编程为iPS 细胞。这之后iPS 细胞的研究和关注度呈爆炸式增长,且取得了一些突破性进展,如建立了疾病特异的人iPS 细胞、借助转座子介导的转基因方法高效制备了virus-free iPS 细胞以及成功地从所获得的iPS 细胞中移除先前导入的转录因子基因。在利用特定小分子化合物的情况下,更少的外源基因导入即可高效率获得iPS 细胞,这向制备无遗传修饰的iPS 细胞方面迈出了一大步。此外,亦建立了大鼠和猴iPS 细胞系,这些成绩将iPS 细胞在临床上的实际应用又大大向前推进了一步,iPS 细胞研究和应用将有望成为21世纪最伟大的医学生物学成就之一[8]。
3 iPS细胞的获得
iPS细胞制备大体分为四步:分离培养宿主细胞;源基因导入宿主细胞;加入小分子物质(如Wnt3a、5-AZA、BIX—01294、VPA、TSA、BayK8644、PD0325901以及CHJR99021等)促进重编程;通过细胞形态、基因表达谱、表观遗传学、畸胎瘤形成和体外分化等方面对ES样克隆进行鉴定,即分离、导入、培养及鉴定四步。下面仅阐述主要步骤。
3.1 转录因子的选择
转录因子的选择体细胞重编程为iPS细胞转录因子组合及数量的确定需要根据体细胞种类及自身转录因子表达水平和加入的小分子化合物三方面综合考虑进行优化。转录因子一般选用Oct4、Sox2、c—Myc、Klf4组合或Oct4、Sox2、KIf4组合。使用小分子化合物可大幅度提高重编程效率和,或减少转录因子使用个数。增加转录因子使用个数,如使用Oct4、Sox2、Nanog、Lin28、c—Myc和Klf4,显著提高重编程效率。神经干细胞或前体细胞本身高表达Sox2、c—Myc和Klf4。当在培养液中加入小分子化合物BIX或PD0325901与CHIR99021,有Oct4和Klf基因,甚至只用Oct4 一个基因,就可显著提高重编程效率。小鼠成熟B细胞需要导人Oct4、Sox2、Klf4、c—Myc和C/EBP等至少5种基因才能诱导成iPS细胞。而加入5-AZA之后,只用前4种因子亦成功诱导为iPS细胞[9]。
当然并不是所有细胞都需要4个转录因子才能诱导成为iPS cell,Sch?ler等证明4种因子可以减少为2个因子(Oct4 加上Klf4或c-Myc)。之
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