补体和细胞因子的检测.ppt

检测系统 指示系统 补体系统 补体系统 反应不发生溶血，证明待测物存在，试验结果阳性。 反应发生溶血，证明待测物不存在，试验结果阴性。 补体结合试验最早应用于梅毒的检测。 补体结合试验曾广泛的应用于临床微生物学检验中，比如：细菌、病毒、衣原体、立克次体等微生物所致疾病的血清学诊断。 在对SARS的诊断中，补体结合试验的灵敏度要高于直接做病毒的分离培养。 五、补体测定的应用 1 、诊断病原体感染 2 、检测补体的功能 3 、补体单个成分及其裂解产物的测定 4 、相关疾病时补体的检测 （ 1 ）免疫性疾病 （ 2 ）与补体有关的遗传性疾病 （ 3 ）补体含量显著降低的疾病 （ 4 ）高补体血症 5 、补体参与的试验 6 、流行病学调查 7 、补体应用于临床治疗后的检测 1 、掌握 CH50 试验的原理及方法学评价 2 、掌握补体结合试验的原理及结果解释 3、熟悉补体检测方法的分类 优 点 灵敏度高、所测定的抗体或抗原水平可达0.05μg/ml ， 出现交叉反应的机率较小， 可检测的抗原或抗体范围广泛， 无需特殊设备、结果容易观察、试验条件要求不高 现 状 影响的因素多、各种制剂需要烦琐的稀释和滴定等， 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对新型免疫方法的建立有着启迪和指导作用 方法评价 图1 抗原（Ag）与抗体（Ab）结合形成免疫复合物（IC） 图2 免疫复合物与补体结合，使补体发生作用，失去活性。 Ag Ag Ag Ag 图1 图2 Ab 补体（complement） SRBC 图1 绵羊红细胞与溶血素（hemolysin）即抗绵羊红细胞结合，形成致敏绵羊红细胞（SRBCs）。 图2 致敏绵羊红细胞与补体结合，使其激活，补体发生溶细胞作用，引起红细胞肿胀，发生溶血。 图1 图2 SRBC SRBC 补体(complement) SRBC SRBC hemolysin SRBCs SRBCs Ag Ag Ab 未知 未知 不存在 未生成 Ag 检测系统 已知 已知 SRBC SRBC hemolysin SRBCs SRBC SRBC SRBC complement SRBCs Ag Ag complement Ag Ag SRBC SRBC SRBCs 无溶血现象 在反应的第一阶段，抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物，抗原抗体复合物与补体结合。 在反应的第二阶段，没有游离补体，致敏绵羊红细胞不溶解，不发生溶血现象。 在反应的第一阶段，抗原没有与抗体结合，没有形成抗原抗体复合物，反应液中有游离补体存在。 在反应的第二阶段，补体与致敏绵羊红细胞结合，使其溶解，发生溶血现象。 应用于补体含量和活性检测的试验 CH50试验，速率溶血法脂质体免疫检测法:反映总补体活性 免疫溶血试验 免疫化学试验 免疫荧光技术 检测补体单个成分及其裂解产物（C1q、C3SP 、C3、C4、B因子等）和补体受体 补体检测方法小结 补体含量和活性相关的疾病 1．免疫相关性疾病： 如自身免疫性疾病时，C1、C2、C3、C4和Hf等缺陷； 超敏反应时（III型超敏反应），C3a、C5a等过敏毒素的产生。 2．与补体有关的遗传性疾病： ①C2、C3缺陷导致的严重感染； ②与C1抑制物缺陷相关的遗传性血管神经性水肿 ③SLE患者出现的细胞表面CR1缺陷与C1C清除障碍 ④涉及I因子、H因子缺陷的肾小球肾炎； ⑤DAF缺陷引起的阵发性血红蛋白尿； ⑥C1q缺陷表现的严重顽固性皮肤损害，以及C1q、C1r、C4、C2缺陷造成的免疫复合物性血管炎（包括肾炎）等。 (图)血管神经性水肿 3．补体含量显著降低的疾病： ①消耗增多:免疫复合物形成导致的补体活化和消耗增多.如SLE. ②补体的大量丢失:主要见于大面积烧伤、失血及肾脏病患者 ③补体合成不足:常见于肝脏疾病患者或营养不良的病人。 4．高补体血症：偶见于感染恢复期和某些恶性肿瘤患者，正常妊娠时，也可观察到补体值的增高。 要 求 补体的检测 一、补体概述 二、单个补体成分的测定 三、补体总活性测定 四、补体结合试验 五、补体测定的应用 一、概 述 补体（complement,C）：由30余种广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面蛋白质组成的、具有精密调控机制的蛋白质反应系统，其活化过程表现为一系列丝氨酸蛋白酶的级联酶解反应。 在机体的免疫系统中担负着