纤维素酶基因克隆与表达.pdf

动物营养学报２０１２，２４（６）：１０１３１０１８ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６２６７ｘ．２０１２．０６．００４ 纤维素酶基因克隆与表达 卢　敏　王帅豪　狄元冉　袁　林　尹清强 （河南农业大学牧医工程学院，郑州 ４５０００２） 摘　要：纤维素酶应用广泛，但因受到酶活低、成本高等诸多因素的制约，纤维素酶的工业化生 产和应用受到限制。应用基因工程技术来获得高活性、高产量的纤维素酶资源越来越受到人们 的重视。本文对纤维素酶分子结构、基因的克隆、原核与真核表达进展进行了综述，并提出构建 纤维素酶酵母表达系统、木霉表达系统以及多个纤维素酶基因共表达系统是未来纤维素酶基因 工程的发展趋势。 关键词：纤维素酶；基因工程；原核表达；真核表达 中图分类号：Ｓ８５２．２　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１００６２６７Ｘ（２０１２）０６１０１３０６ 　　纤维素是自然界中最丰富的天然有机物，占 植物界碳含量的５０％以上，堪称为世界上总量最 １　纤维素酶的组成 大的可再生资源。地球每年都会产生大量的植物 　　纤维素酶是将纤维素水解成纤维二糖和葡萄 纤维素，我国仅农作物秸秆年产量就高达 ６× 糖的一组复杂酶系的总称，细菌、真菌、放线菌等 ８ ８ １０～７×１０ｔ，但这些宝贵的纤维素资源并没有被 微生物都能产纤维素酶。细菌纤维素酶不能分泌 有效地利用，只有少部分用于造纸、纺织或用作粗 到胞外，而且产量少、酶系单一、活性低。真菌则 饲料、薪柴等，大部分以堆积、荒烧等形式直接倾 能产生大量的胞外纤维素酶，酶系较完全，产纤维 入环境，造成极大的污染和浪费［１］。合理地开发 素酶的真菌来源十分广泛，如木霉属、曲霉属和青 与利用纤维素资源对人类生存环境和可持续发展 霉属等。其中木霉不产生毒素，而且产酶效率高、 有着举足轻重的影响。 活性高、酶性稳定，是目前应用最广的纤维素酶生 　　利用微生物及其产生的纤维素酶（ｃｅｌｌｕｌａｓｅ） 产菌［２］。 来分解纤维素是一种有效且无污染的方法。纤维 　　纤维素酶并不是一种单一组分的酶，而是由 素酶是降解纤维素的高活性生物催化剂，广泛用 许多高协同作用的水解酶组成的复合酶体系，根 于饲料、环保、食品、酿酒、纺织、造纸等领域，但纤 据其催化反应功能的不同可分为：１）内切葡聚糖 维素酶的工业化生产受到酶效率低、热稳定性差 酶［内切 －１，４Ｄ－葡聚糖酶（ｅｎｄｏ１，４Ｄ β β 以及成本较高等诸多因素的限制。随着生物技术 ｇｌｕｃａｎａｓｅ），ＥＣ３．２．１．４］，来自真菌的简称为ＥＧ， 的发展，利用基因工程手段开发高活性、高产量的 来自细菌的简称为Ｃｅｎ，又称 Ｃｘ、ＣＭＣ；２）外切葡 纤维素酶资源越来越受到国内外学者的重视。目 聚糖酶［外切－１，４Ｄ－葡聚糖酶（ｅｘｏ１，４Ｄ β β 前，纤维素酶基因的克隆及表达已经取得了很大 ｇｌｕｃａｎａｓｅ），ＥＣ３．２．１．９１］，来 自真菌的简称为 的进展，本文旨在对纤维素酶基因工程研究的进 ＣＢＨ，来自细菌的简称为Ｃｅｘ，又称 Ｃ１、微晶纤维 展、发展前景进行简要的综述。 素酶；３） －葡萄糖苷酶［１，４－葡萄糖苷酶（